旨在了解胰島素降解酶(insulin-degrading enzyme,Ide)在豬不同組織中的表達(dá)情況,及其在C2C12成肌細(xì)胞增殖和分化中的作用。本研究利用RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測了Ide在8月齡雄性小型豬不同組織中的表達(dá);利用siRNA技術(shù)干擾Ide表達(dá),檢測了Ide在C2C12成肌細(xì)胞增殖、凋亡和分化中的作用,試驗分為Ide-siRNA處理組和NC-siRNA(negative control)對照組,每組3個重復(fù)。結(jié)果顯示,Ide在豬的不同組織(包括大腦、股四頭肌、股二頭肌、背最長肌、心、肝、脾、肺、腎和睪丸)中廣泛表達(dá),其中,在股四頭肌、腎和睪丸中表達(dá)量相對更高。Ide-siRNA轉(zhuǎn)染成肌細(xì)胞48 h后,Ide表達(dá)量極顯著下降(P<0.001)。CCK-8檢測顯示,干擾Ide表達(dá)促進(jìn)了成肌細(xì)胞的增殖,細(xì)胞周期相關(guān)基因表達(dá)也顯著升高,同時發(fā)現(xiàn)干擾Ide表達(dá)未引起成肌細(xì)胞凋亡。利用2%馬血清誘導(dǎo)成肌細(xì)胞分化的同時轉(zhuǎn)染Ide-siRNA以干擾其表達(dá),在分化的第2和5天發(fā)現(xiàn),與對照組相比,分化相關(guān)基因Myog、Myhc等在干擾組中的表達(dá)均顯著下降...

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【部分圖文】：

圖1 Ide在小型豬不同組織中的表達(dá)

對小型豬大腦、股四頭肌、股二頭肌、背最長肌、心、肝、脾、肺、腎和睪丸10個組織中IdemRNA和蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn),IdemRNA在小型豬不同組織中均有表達(dá)(圖1A),Westernblotting結(jié)果(圖1B)顯示,IDE蛋白在股四頭肌、腎和睪丸中表達(dá)量高于其....

圖2 Ide-siRNAs干擾效率檢測

成肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Ide-si-1和NC-siRNA48h后檢測成肌細(xì)胞相關(guān)基因Myod、Myog的表達(dá)變化,結(jié)果如圖3所示,RT-qPCR檢測mRNA相對表達(dá)量發(fā)現(xiàn),降低Ide表達(dá)后(P<0.001),成肌細(xì)胞相關(guān)基因Myod(P<0.01)和Myog(P<0.05)的表達(dá)顯著....

圖3 干擾Ide 48h后成肌細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)

圖2Ide-siRNAs干擾效率檢測2.4干擾Ide表達(dá)促進(jìn)成肌細(xì)胞增殖

圖4 干擾Ide對成肌細(xì)胞增殖的影響

為了解Ide在成肌細(xì)胞分化中的作用,使用2%馬血清誘導(dǎo)細(xì)胞成肌分化的同時轉(zhuǎn)染Ide-si-1和NC-siRNA,計為第0天,在第3天再次轉(zhuǎn)染,收集第2(D2)和5天(D5)細(xì)胞,檢測分化相關(guān)基因的表達(dá)。RT-qPCR結(jié)果顯示,與對照組相比,Ide干擾組在分化第2天,隨著Ide表達(dá)....

本文編號：4047116