叢枝菌根真菌（Arbuscular Mycorrhizal Fungus,AM）能與植物根系形成互惠共生體,促進植物生長發(fā)育,改善礦質(zhì)營養(yǎng),提高抗逆性等,在農(nóng)業(yè)和林業(yè)上有著廣泛的應用前景,但AM真菌是專性活體營養(yǎng)微生物,至今無法實現(xiàn)離體純培養(yǎng)。本試驗以煙草品種NC82、Va116為宿主植物,獲得煙草無菌苗;用發(fā)根農(nóng)桿菌C58C1、A4侵染受傷葉片,獲得煙草Ri T-DNA轉(zhuǎn)型根（毛狀根）,篩選發(fā)根農(nóng)桿菌菌種和煙草品種最佳組合;對幾種AM真菌孢子進行形態(tài)學和分子生物學鑒定,孢子的消毒、萌發(fā)、篩選較好的消毒處理;將萌發(fā)的幾種AM真菌孢子與煙草毛狀根共培養(yǎng),對共生培養(yǎng)體系進行了檢測。獲得以下結(jié)果:1、NC82和Va116煙草種子采用75%乙醇消毒60s,再10%次氯酸鈉消毒15min,無菌水沖洗3次,接種于MS固體培養(yǎng)基,25℃恒溫培養(yǎng),萌發(fā)效果最好,萌發(fā)率高達到80%以上,污染率小于15%。2、當發(fā)根農(nóng)桿菌A4、C58C1菌液OD₆₀₀值在0.6～0.8時,侵染煙草NC82、Va116無菌苗的葉片,發(fā)根農(nóng)桿菌A4對NC82、Va116的誘導率分別為23.33%、21.4...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1叢枝菌根結(jié)構(gòu)模式圖(引自麻錦敏,2010)

根外菌絲進入植物細胞后形成了根內(nèi)菌絲,而根內(nèi)菌絲在植物細胞中進過連續(xù)的分支形成的一種灌木狀結(jié)構(gòu),我們稱之為叢枝。叢枝能夠從宿主植物獲取營養(yǎng)的結(jié)構(gòu),幫助AM真菌生長發(fā)育,因此叢枝是AM真菌至關(guān)重要的結(jié)構(gòu)。叢枝在宿主體內(nèi)不能存活太長的時間,一般在2～3周后被降解,被降解的叢枝其細胞質(zhì)....

圖2-1毛狀根誘導率

從圖2-1中可以看出,不同的發(fā)根農(nóng)桿菌對不同的煙草品種其侵染率不同。在菌液OD600值為0.6～0.8,侵染時間9～10min情況下,用發(fā)根農(nóng)桿菌A4、C58C1對煙草品種Va116、NC82進行誘導,均能誘導出毛狀根,其誘導率分別為21.43%、23.33%、70.97%、35....

圖2-2煙草毛狀根rol B基因的PCR檢測

(2)分子鑒定:用rolB基因序列的特異性引物(741bp),對發(fā)根農(nóng)桿菌C58C1、A4誘導煙草NC82、Va116產(chǎn)生的毛狀根DNA進行PCR檢測。其擴增反應產(chǎn)物結(jié)果如圖2-2,在誘導產(chǎn)生的毛狀根基因組DNA中都檢測出了擴增長度為741bp特異性條帶。表明發(fā)根農(nóng)桿菌C58C....

圖3-1基于18S r DNA AML1-AML2區(qū)序列的系統(tǒng)發(fā)育樹

登錄NCBI將序列提交GenBank,獲取的登錄號為:MT478166、MT476855、MT473234,進行BLAST比對后,下載與這兩條序列相似性達98%以上的序列,以Glomus、Claroideoglomus、Acaulospora的菌種序列作為分析序列,用Apiot....

本文編號：4055066