【摘要】： 目的 本課題旨在探索一種新的STR基因座復(fù)合擴(kuò)增方法，我們稱為嵌合引物STR復(fù)合擴(kuò)增法。應(yīng)用熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳激光自動(dòng)檢測技術(shù)平臺(tái)，建立一套新的法醫(yī)STR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系，并按照美國DNA分析方法技術(shù)工作組(The Technology Working Group on DNA Analysis Methods，TWGDAM)的指導(dǎo)方案進(jìn)行法醫(yī)學(xué)實(shí)用性研究。方法 利用PCR嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增D1S1612、D9S2026、D20S161、D6S477 STR基因座，用聚丙烯酰胺電泳對(duì)PCR產(chǎn)物分離，銀染；應(yīng)用毛細(xì)管電泳激光自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)熒光標(biāo)記的嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測；用混合樣本、不同的組織、不同的介質(zhì)、常見的動(dòng)物在不同的模板量、不同的溫度條件下對(duì)嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行測試，用實(shí)際案例進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 通過采用公共引物和基因座特異性嵌合引物的方法，，建立了法醫(yī)STR基因座嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增方法。這種方法擴(kuò)增條件易于優(yōu)化，不同基因座擴(kuò)增條件的齊同性要求不高，對(duì)引物二聚體有一定程度的包容性，可用國產(chǎn)Taq酶做出 四川大學(xué) 博士學(xué)位論文 董建國 穩(wěn)定而滿意的結(jié)果，是一種成本低效率高的法醫(yī)STR基因座復(fù)合 擴(kuò)增的方法。建立了DIS1612、D952026、D205161、D65477 STR 基因座熒光標(biāo)一記嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增毛細(xì)管電泳激光自動(dòng)分析體 系，同時(shí)證明嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增方法與毛細(xì)管電泳激光自動(dòng)分析 方法相兼容。按照TWGDAM指導(dǎo)方案的基本要求，對(duì)該體系進(jìn) 行了法醫(yī)實(shí)用性研究。證明該體系對(duì)同一個(gè)體的不同組織檢測結(jié) 果一致;對(duì)常見介質(zhì)上的檢材及混合樣本具有檢測能力;對(duì)80OC 放置6天的檢材、戶外陽光下放置14天的檢材仍然可分型;可對(duì) 0.25ng的微量DNA模板分型;與15種常見動(dòng)物和微生物無交叉 反應(yīng);應(yīng)用于案例檢測，與鑒定結(jié)論一致。 結(jié)論建立了法醫(yī)四個(gè)遺傳標(biāo)記DIS1612、D952026、 D205161、D65477新的熒光標(biāo)記嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增體系，證明該 體系可成功應(yīng)用于熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳激光自動(dòng)分析檢測平臺(tái)。 法醫(yī)應(yīng)用性研究證明，新的熒光標(biāo)記嵌合引物復(fù)合擴(kuò)增體系 分型結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，靈敏度高，對(duì)陳舊斑痕和混合斑具有 檢測能力，能夠?qū)ΤＲ娊橘|(zhì)上的斑痕正確分型，與常見的種動(dòng)物 及微生物無交叉反應(yīng)，可成功應(yīng)用于法醫(yī)檢案。
[Abstract]:Objective to explore a new method for multiplex amplification of STR loci, which is called chimeric primer STR multiplex amplification. A new multiplex amplification system of forensic STR loci was established by using fluorescence labeled capillary electrophoresis laser automatic detection platform. The practicability of forensic science was studied according to the guidance of the Technology working Group on DNA Analysis methods (TWGDAM). Methods D1S1612D9S2026 D20S161D6S477 STR loci were amplified by PCR chimeric primers. PCR products were isolated by polyacrylamide electrophoresis and stained with silver. The fluorescent labeled chimeric primer compound amplification products were detected by capillary electrophoresis laser automatic analysis system, mixed samples, different tissues, different media, common animals in different templates, The chimeric primer compound amplification system was tested under different temperature conditions and verified by practical cases. Results by using common primer and locus specific chimeric primer, a multiplex amplification method of forensic STR locus chimeric primer was established. The amplification conditions of this method are easy to optimize, the homogeneity of different loci amplification conditions is not high, and the primer dimer has a certain degree of inclusiveness. Using domestic Taq enzyme to make Sichuan University Dong Jianguo's stable and satisfactory results in his doctoral thesis, It is a low cost and high efficiency method for multiplex amplification of forensic STR loci. DIS1612 D952026 (D205161) D65477 STR locus fluorescent marker and chimeric primers were used to amplify capillary electrophoresis (CE) laser automatic analysis system, and the results showed that DIS1612, D952026 and D205161D65477 STR locus were amplified by capillary electrophoresis. At the same time, it was proved that the multiplex amplification method of chimeric primers was compatible with the laser automatic analysis method of capillary electrophoresis. In accordance with the basic requirements of the TWGDAM guidance scheme, the forensic practicability of the system was studied. It is proved that the system has the same ability to detect fruit formation in different tissues of the same individual, and has the ability to detect samples and mixed samples from common media. The samples placed in 80OC for 6 days and those stored in outdoor sunlight for 14 days could still be classified. MicroDNA template typing of 0.25ng; no cross reaction with 15 common animals and microbes. It is consistent with the conclusion of identification. Conclusion the multiplex amplification system of four genetic markers, DIS1612, D952026, D205161, D65477, was established. It is proved that the system can be successfully applied to the automatic detection platform of fluorescence labeled capillary electrophoresis with laser. The results of the new fluorescent marker chimeric primer multiplex amplification system were stable, reproducible and sensitive. It has the ability to detect the old marks and mixed spots, and can correctly type the marks on the common media. No cross-reaction with common animals and microorganisms can be successfully used in forensic examination.
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：D919

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2135157