發(fā)布時間：2024-04-10 03:54

　　紅藻是藻類中重要的一大類群,在海洋生態(tài)、生物進化研究及食物和藥物利用方面都具有極大的價值。紅藻最大的特征就是其捕光天線系統(tǒng)——由藻膽蛋白和連接多肽組裝形成的藻膽體。紅藻的藻膽體來源于藍藻,但遠比藍藻更為復(fù)雜,而目前藻膽蛋白和藻膽體(尤其是藻膽體)方面的研究主要集中在藍藻,關(guān)于的紅藻研究也多集中在低等紅藻,如紫球藻、紫菜等,關(guān)于紅藻藻膽體的研究更少目前基本是空白。本文研究了海洋高等紅藻多管藻藻紅蛋白和藻膽體的特性,以期為紅藻藻膽體結(jié)構(gòu)的研究打下基礎(chǔ)。本文研究了利用SDS-PAGE進行R-藻紅蛋白亞基分析的適宜條件,并得到了很好地結(jié)果,可以使各亞基清晰地分離。影響蛋白質(zhì)SDS-PAGE的關(guān)鍵性因素是SDS濃度和離子強度,它們的作用機制應(yīng)與SDS的臨界膠團濃度及電泳系統(tǒng)中的單體SDS濃度或比例有關(guān),本研究還可為其他蛋白質(zhì)的亞基分析提供參考。分析多管藻藻紅蛋白的亞基組成,主要有四種亞基：α、β、γ1、γ2,但SDS-PAGE分析時還發(fā)現(xiàn)兩條分子質(zhì)量大小約40 kDa和50 kDa的條帶。通過研究得到了這兩個條帶的組成,分析其形成原因,為研究藻紅蛋白各亞基間的關(guān)系、發(fā)色團的位置(尤其是γ亞基)及...

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 海洋紅藻的研究價值
        1.1.1 紅藻在進化上的地位
        1.1.2 紅藻在海洋生態(tài)系統(tǒng)中的地位
        1.1.3 海洋紅藻的研究價值
    1.2 藻膽蛋白
        1.2.1 藻紅蛋白
        1.2.2 藻藍蛋白
        1.2.3 別藻藍蛋白
    1.3 藻膽體
2. 藻紅蛋白的亞基組成分析(一) —SDS-PAGE分析藻紅蛋白亞基組成時的適宜條件
    2.1 材料與方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 藻紅蛋白亞基組成
        2.2.2 四種因素對SDS-PAGE中藻紅蛋白亞基分離效果的影響
        2.2.3 亞基的分子質(zhì)量
    2.3 討論
        2.3.1 影響藻紅蛋白SDS-PAGE的關(guān)鍵因素
        2.3.2 SDS濃度和離子濃度對標準蛋白遷移的影響
        2.3.3 作用機制探討
3. 藻紅蛋白的亞基組成分析(二) —多管藻藻紅蛋白中的42.1 kDa與53.7 kDa多肽
    3.1 材料與方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 SDS-PAGE分析藻紅蛋白亞基組成
        3.2.2 梯度native-PAGE制備之R-PE SDS-PAGE
        3.2.3 R-PE第二次SDS-PAGE
        3.2.4 光照對R-PE的影響
    3.3 討論
        3.3.1 42.1 kDa和53.7 kDa條帶的形成原因
        3.3.2. γ亞基對于R-PE聚合體穩(wěn)定性的作用
4. 多管藻藻紅蛋白的種類和聚合體形式(一) —直接提取的粗藻膽蛋白分析
    4.1 材料與方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 50 mmol/L磷酸緩沖液浸提粗藻膽蛋白Sephadex G-150層析
        4.2.2 水浸提粗藻膽蛋白Sephadex G-150層析
        4.2.3 水浸提粗藻膽蛋白PE315-PE360部分第二次Sephadex G-150層析
        4.2.4 水浸提粗藻膽蛋白放置9 d后Sephadex G-150層析
    4.3 討論
5. 多管藻藻紅蛋白的種類和聚合體形式(二) —藻膽體中的藻紅蛋白
    5.1 材料與方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 解離藻膽體的蔗糖密度梯度離心
        5.2.2 解離藻膽體的native-PAGE分析
    5.3 討論
6. 多管藻藻膽體的光譜特性
    6.1 材料與方法
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 藻膽體熒光發(fā)射光譜
        6.2.2 藻膽體解離后的熒光發(fā)射光譜
        6.2.3 藻紅蛋白的熒光發(fā)射光譜
        6.2.4 藻膽體熒光激發(fā)光譜
    6.3 討論
7. 多管藻藻膽體穩(wěn)定性的研究(一) —低濃度PBS對藻膽體的解離作用
    7.1 材料與方法
    7.2 結(jié)果與分析
        7.2.1 PBS濃度對藻膽體穩(wěn)定性的影響
        7.2.2 500 mmol/L PBS條件下不同時間及調(diào)回1.0 mol/L后藻膽體熒光特性的變化
        7.2.3 500 mmol/L PSS處理后藻膽體的密度梯度離xin
8. 多管藻藻膽體穩(wěn)定性的研究(二) —不同離子對藻膽體穩(wěn)定性的影響
    8.1 材料與方法
    8.2 結(jié)果
        8.2.1 Na⁺、Mg²⁺、Cl^-、SO4
2-對藻膽體穩(wěn)定性的影響
        8.2.2 一價陽離子對藻膽體穩(wěn)定性的影響
        8.2.3 不同一價陰離子對藻膽體穩(wěn)定性的影響
        8.2.4 Zn²⁺對藻膽體穩(wěn)定性的影響
    8.3 討論
9. 多管藻藻膽體的結(jié)構(gòu)分析(一) —藻紅蛋白-藻藍蛋白復(fù)合物的特性分析
    9.1 材料與方法
    9.2 結(jié)果與分析
        9.2.1 藻紅蛋白-藻藍蛋白復(fù)合物的制備
        9.2.2 藻膽蛋白各組分的吸收與熒光特性
        9.2.3 藻膽蛋白各組分的差光譜分析
    9.3 討論
        9.3.1 587 nm發(fā)色團的位置
        9.3.2 587 nm發(fā)色團的作用
10. 多管藻藻膽體的結(jié)構(gòu)分析(二) —藻紅蛋白與藻膽體的穩(wěn)定化處理
    10.1 材料與方法
    10.2 結(jié)果與分析
        10.2.1 甲醛交聯(lián)藻紅蛋白
        10.2.2 甲醛交聯(lián)藻膽體
        10.2.3 EDC交聯(lián)藻膽體
    10.3 討論
11. 多管藻藻膽體的結(jié)構(gòu)分析(三) —藻紅蛋白與藻膽體的酶切分析
    11.1 材料與方法
    11.2 結(jié)果與分析
        11.2.1 藻紅蛋白的酶切分析
        11.2.2 藻膽體的酶切分析
    11.3 討論
        11.3.1 γ亞基的位置
        11.3.2 兩種蛋白酶對藻紅蛋白和藻膽體的作用位點
12. 關(guān)于紅藻藻膽體結(jié)構(gòu)的探討
    12.1 藍藻中的藻膽體
    12.2 紅藻中的藻膽體
總結(jié)
參考文獻
致謝
個人簡歷
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本文編號：3950109

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