發(fā)布時間：2020-11-09 23:01

　　 羔羊斷奶應(yīng)激是困擾我國養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展的嚴(yán)重問題,抗菌肽具有較小的分子量,能夠安全穩(wěn)定地為自然界各種生物提供保護(hù),其具有獨有的破膜殺菌機(jī)制以及不易引起細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的特點,為降低斷奶應(yīng)激提供了新的解決思路。試驗采用單因素試驗設(shè)計方法,選取48只7日齡公羔,根據(jù)體重相近原則平均分為4組(每組3個重復(fù),每個重復(fù)4只)。單體肽組飼喂添加300 mg/kg單體肽的基礎(chǔ)日糧,串聯(lián)肽組飼喂添加300 mg/kg串聯(lián)肽的基礎(chǔ)日糧,抗生素組飼喂添加300 mg/kg抗生素的基礎(chǔ)日糧,空白組飼喂基礎(chǔ)日糧,試驗期28天。于羔羊14,21,28和35日齡時,在每個重復(fù)中隨機(jī)取1只羔羊屠宰。采用組織學(xué)技術(shù)研究小腸組織及黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu),采用相對熒光定量PCR技術(shù)研究小腸上皮緊密連接蛋白基因相對表達(dá)量及肝組織中免疫受體及免疫細(xì)胞因子基因相對表達(dá)量。采用ELISA酶聯(lián)反應(yīng)試劑盒檢測血清中免疫球蛋白含量,采用高通量測序研究盲腸腸道菌群結(jié)構(gòu)組成。結(jié)果顯示:1、日糧添加抗菌肽CC31單體肽和串聯(lián)肽顯著增加十二指腸、空腸和回腸絨毛高度、絨腺比及絨毛表面積(P0.05),并顯著降低隱窩深度(P0.05)。2、單體肽組顯著提高十二指腸ZO-1基因相對表達(dá)量(P0.05),單體肽組有提高Claudin-1基因相對表達(dá)量的趨勢,抗生素組、串聯(lián)肽組和單體肽組均顯著提高了空腸ZO-1基因相對表達(dá)量(P0.05),單體肽組和抗生素組顯著提高了空腸Claudin-1基因相對表達(dá)量(P0.05),串聯(lián)肽組具有提高空腸Claudin-1基因相對表達(dá)量趨勢,單體肽組具有提高回腸ZO-1基因相對表達(dá)量趨勢。3、隨著日齡的增長,羔羊血清中Ig A、IgG和IgM含量均顯著增加,串聯(lián)肽組和單體肽組均顯著提高了羔羊血清中IgA含量(P0.05),與抗生素組無顯著差異(P0.05)。單體肽組顯著提高了IgG含量(P0.05),串聯(lián)肽組具有提高IgG含量的趨勢,單體肽組顯著提高血清中IgM含量(P0.05),串聯(lián)肽組具有提高羔羊血清中Ig M含量的趨勢。4、單體肽組和串聯(lián)肽組顯著下調(diào)了TLR2和TLR4基因相對表達(dá)量(P0.05)。單體肽組和串聯(lián)肽組均顯著下調(diào)IL-6基因、IL-2基因、IFN-γ基因和TNF-α基因相對表達(dá)量(P0.05)。5、羔羊腸道菌群主要由厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)及放線菌門(Actinobacteria)組成。擬桿菌門(Bacteroidetes)在14 d、21 d時,串聯(lián)肽組和單體肽組顯著高于空白組,厚壁菌門(Firmicutes)在35 d時串聯(lián)肽組和單體肽組顯著高于空白組(P0.05),放線菌門(Actinobacteria)在35 d時,單體肽組顯著低于空白組(P0.05),變形菌門(Proteobacteria)在14 d時單體肽組具有高于空白組的趨勢,在21 d時串聯(lián)肽組顯著高于空白組(P0.05)。試驗結(jié)果表明:抗菌肽CC31具有促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞發(fā)育,改善腸道組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的功能;抗菌肽CC31能夠上調(diào)腸道上皮緊密連接蛋白基因相對表達(dá)量,保障腸道粘膜屏障功能;抗菌肽CC31能夠提高羔羊血清中Ig A、IgG和Ig M含量,有助于羔羊機(jī)體免疫系統(tǒng)的構(gòu)建;抗菌肽CC31具有下調(diào)羔羊組織中TLR2和TLR4基因相對表達(dá)量以及促炎細(xì)胞因子IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ基因相對表達(dá)量的作用,降低了羔羊斷奶應(yīng)激引起的炎癥反應(yīng),有助于羔羊機(jī)體免疫系統(tǒng)的建立;抗菌肽CC31對羔羊盲腸腸道菌群結(jié)構(gòu)組成具有一定的影響,具有提高腸道菌群豐度和多樣性的作用,并起到提高有益菌群的定植,降低有害菌含量的作用。結(jié)論:抗菌肽CC31單體肽和串聯(lián)肽具有降低羔羊斷奶應(yīng)激影響,保障羔羊腸道健康發(fā)育,促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)的建立,改善腸道菌群的作用。單體肽與串聯(lián)肽相比,單體肽效果較串聯(lián)肽更好。
【學(xué)位單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S826.5
【部分圖文】：

（JNK）和 IRF 轉(zhuǎn)錄因子家族（IRF-5），直接誘導(dǎo)表達(dá)促炎癥細(xì)胞因子；另一條激K 復(fù)合體，磷酸化并激活 IκB 激酶，與 NF-κB 結(jié)合，由此進(jìn)行誘導(dǎo)核酸，導(dǎo)致一系列因表達(dá)促炎癥細(xì)胞因子，如 TNF、IL-1、MMP 等，完成信號通路的傳導(dǎo)（見圖 1-1D88 依賴型信號通路在許多炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用，該信號通路在香煙煙霧誘導(dǎo)的肺中扮演了重要的角色[84]。TLR4 的胞內(nèi)區(qū) TIR 結(jié)構(gòu)域 與 TRAM 相連，作用于 TR活化并與 TRAF6 結(jié)合，然后將信號傳導(dǎo)至 IRF-3，將其磷酸化后形成同源二聚體核，誘導(dǎo) IFN 基因表達(dá)。TLR4 的信號傳導(dǎo)活性受細(xì)胞膜中的膽固醇水平調(diào)節(jié)，進(jìn)雙磷脂（bis(monoacylglycero)phosphate，BMP）的影響。Ciesielska 等（2016）[85]添加 BMP 異構(gòu)體摻入到巨噬細(xì)胞的質(zhì)膜和胞內(nèi)囊泡中，能強(qiáng)烈降低 LPS 刺激的（RANTES）的產(chǎn)生，其與控制 RANTES 表達(dá)的干擾素調(diào)節(jié)因子 3（IRF 3）的抑制相比 MYD88 依賴型通路，MYD88 非依賴性通路更為簡單一些，然而卻具有重要的其誘導(dǎo)產(chǎn)生的 IFN 是一種廣譜抗病毒劑，其發(fā)揮作用并不是直接殺死或抑制病毒胞表面受體結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞表面產(chǎn)生抗病毒蛋白，提高細(xì)胞自身免疫力。

抗菌肽 CC31 單體肽和串聯(lián)肽對羔羊小腸生長發(fā)育、免疫及盲腸菌群的影響譜抑菌活性[115]，阻斷了腸道內(nèi)病原微生物及其產(chǎn)物對腸道上皮緊密連接蛋白的破道稱，腸道內(nèi)革蘭氏陰性菌分泌脂多糖（LPS），直接破壞腸道上皮細(xì)胞緊密連接，使細(xì)胞旁通透性增加，使病原微生物及其代謝產(chǎn)物透過腸道黏膜屏障進(jìn)入血液循引起各種炎癥反應(yīng)（如圖 3-2 所示）。當(dāng)細(xì)胞間緊密連接蛋白被破壞，細(xì)胞同樣受損正產(chǎn)的蛋白表達(dá)分泌系統(tǒng)，從而降低了兩種緊密連接蛋白的相對表達(dá)量。

第六章 抗菌肽 CC31 單體肽和串聯(lián)肽對羔羊盲腸腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響個樣本的Shannon 多樣性曲線（圖 2-3B）已經(jīng)達(dá)到平坦?fàn)顟B(tài)，兩圖綜合可說明本實驗的測序深度可反映羔羊盲腸中菌群的多樣性，α多樣性中Coverage指數(shù)均在99.7%以上，說明樣品內(nèi)多樣性覆蓋率已經(jīng)達(dá)到確保樣本信息真實性要求。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2877077