近年來人們發(fā)現(xiàn)了許多神經(jīng)保護短肽具有很強的神經(jīng)保護作用,而且它們的分子量小,能夠自由通過血腦屏障,在AD等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療中具有廣闊的前景。然而神經(jīng)保護短肽在臨床應用中普遍存在著半衰期短,人工合成的價格昂貴等問題。為了能將神經(jīng)短肽用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療,本研究構建了攜帶融合基因NT4-NAP的慢病毒載體,實現(xiàn)了神經(jīng)保護短肽NAP在體內的持續(xù)分泌表達,通過體外細胞學實驗和閉合性腦損傷動物模型證實了可分泌表達NAP的重組慢病毒具有較強的神經(jīng)保護作用。為了實現(xiàn)重組慢病毒能在體內持續(xù)分泌表達的目的和證實其神經(jīng)保護作用,本研究進行了以下實驗:1、構建分泌表達NAP的重組慢病毒采用PCR方法,克隆了融合基因NT4-NAP cDNA,應用重組病毒包裝技術構建了可分泌表達神經(jīng)保護肽NAP的重組慢病毒。2、建立APPsw轉基因細胞模型利用逆轉錄病毒載體,在神經(jīng)母細胞瘤細胞內表達突變β淀粉樣肽前體蛋白APPsw基因。3、通過體內外實驗驗證可分泌表達NAP的重組慢病毒的神經(jīng)保護作用①選用構建的AD細胞模型,體外感染重組慢病毒rLent/NT4-NAP,通過RT-PCR檢測NT4-NAP基因在細胞內... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

VIP刺激膠質細胞分泌神經(jīng)營養(yǎng)物質3．NAP

該外殼蛋白與細胞表面受體的識別決定了病毒顆�？赊D導細胞且這些外殼蛋白就是根據(jù)相對應的細胞表面受體進行分類的[61]。逆轉錄病毒生活周期的第一階段是病毒整合入細胞基因組，導致前的建立。逆轉錄病毒生活周期的第二階段是新病毒顆粒的裝配和釋毒的結構基因編碼合成病毒蛋白，與轉錄出的病毒基因組 RNA 裝的病毒顆粒，在細胞的表面以出芽方式釋放。（見圖 1-2）

多克隆位點、目的基因、選擇標志基因取代，僅保留 LTR 及病毒包裝信 序列。2）組建包裝細胞系。對于病毒顆粒構建、識別等過程所必須的 gag、 env 基因整合在包裝細胞的基因組內。3）重組逆轉錄病毒的包裝、收集。將含有目的基因的重組逆轉錄病毒轉染包裝細胞獲得可用于轉導的重組逆轉錄病毒顆粒，用抗性標記篩選穩(wěn)定的細胞株。（見圖 1-3）4）轉導細胞，進行蛋白表達。用所得缺陷型重組病毒感染靶細胞，隨病毒 DNA 的整合，目的基因也整合到靶細胞基因組中并進行表達，完因轉移。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2897590