人胰島素樣生長因子-1和RNA干擾多聚蛋白聚糖酶-1基因?qū)θ斯撬韪杉毎羌艿挠绊懷芯?/H1>
發(fā)布時間：2018-09-19 18:45
【摘要】：背景:目前慢病毒介導aggrecanase-1sh RNA及h IGF-1雙向作用于類風濕患者骨髓間充質(zhì)干細胞的研究還處在初級階段。目的:觀察在將aggrecanase-1sh RNA、h IGF-1基因同時轉(zhuǎn)染到人骨髓間充質(zhì)干細胞后,目的基因在細胞內(nèi)的表達及細胞分化情況。方法:體外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞,并應用攜帶aggrecanase-1sh RNA、h IGF-1基因和綠色熒光蛋白的慢病毒載體轉(zhuǎn)染第3代人骨髓間充質(zhì)干細胞,同時以空載體轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細胞作為陰性對照組。待病毒轉(zhuǎn)染率到最高時分別提取各組細胞的蛋白檢測從而得出目的基因表達量。并應用激光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染成功后細胞的骨架及細胞形態(tài)。結(jié)果與結(jié)論:成功于體外培養(yǎng)出人骨髓間充質(zhì)干細胞,而且以慢病毒為載體成功的將目的基因轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)。熒光顯微鏡下可觀察到細胞發(fā)出綠色熒光,各組的平均轉(zhuǎn)染效率可達到88%。Western blot檢測結(jié)果及激光共聚焦顯微鏡下細胞形態(tài)顯示,目的基因在人骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)可高效持續(xù)的表達出相應蛋白,且細胞形態(tài)變化也可間接證明aggrecanase-1sh RNA、h IGF-1基因可共同促進人骨髓干細胞向軟骨的定向分化。
[Abstract]:BACKGROUND: At present, the research of lentivirus-mediated aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 acting on bone marrow mesenchymal stem cells of rheumatoid patients is still in its infancy. Objective: To observe the expression and cell differentiation of the target gene after transfecting aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 gene into bone marrow mesenchymal stem cells. METHODS: Human bone marrow mesenchymal stem cells were cultured in vitro and transfected into the third generation of human bone marrow mesenchymal stem cells with lentiviral vector carrying aggrecanase-1sh RNA, h IGF-1 gene and green fluorescent protein, and the human bone marrow mesenchymal stem cells were transfected with empty vector as negative control group. RESULTS AND CONCLUSION: Human bone marrow mesenchymal stem cells were successfully cultured in vitro, and the target gene was successfully transfected into cells by lentivirus vector. The results were observed under fluorescence microscope. The results of Western blot and confocal laser microscopy showed that the target gene could efficiently and sustainably express the corresponding protein in human bone marrow mesenchymal stem cells, and the changes of cell morphology could indirectly prove aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 gene. It can promote the directional differentiation of human bone marrow stem cells into cartilage.
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R684
【相似文獻】
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1 邱齡;肖傳實;曾秋棠;李茂蓮;;靶向血管緊張素Ⅱ受體基因的短發(fā)夾RNA的功能比較[J];第四軍醫(yī)大學學報;2006年23期
2 楊成明;張?zhí)m華;趙燕穎;吳雅臻;;整合素α_vβ_3小干擾RNA載體構(gòu)建及其對人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞的干擾效應檢測[J];中國老年學雜志;2008年07期
3 嚴小虎;常山;田家亮;;RNA干擾治療新進展[J];西南軍醫(yī);2008年04期
4 王志勇;呂延成;;RNA干擾中小干擾RNA的設(shè)計原則[J];醫(yī)學綜述;2010年05期
5 徐寧,陳智;哺乳動物RNA干擾中的小干擾RNA表達載體[J];國外醫(yī)學.流行病學傳染病學分冊;2004年04期
6 于國龍,何蘊韶;遺傳學研究的新工具:RNA干擾[J];國外醫(yī)學.遺傳學分冊;2005年04期
7 戚中田;嚴重急性呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒基因組研究的新技術(shù)——RNA干擾[J];第二軍醫(yī)大學學報;2003年06期
8 周昌華;章崇杰;;化學修飾小干擾RNA研究進展[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2006年08期
9 羅潔;夏曉波;熊思奇;宋偉濤;;RNA干擾對低分化鼻咽癌細胞血管內(nèi)皮生長因子表達的抑制作用[J];眼視光學雜志;2006年05期
10 何軍華;肖傳實;李茂蓮;邊云飛;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶短發(fā)夾RNA對自發(fā)性高血壓大鼠的降壓效果[J];中華高血壓雜志;2008年08期
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1 郭德銀;;RNA干擾在病毒研究和控制中的應用[A];第二屆中國青年學者微生物遺傳學學術(shù)研討會論文集[C];2006年
2 丁浩;李菊香;孫國芳;洪葵;程曉曙;;RNA干擾沉默細胞信號轉(zhuǎn)導抑制因子-1的表達對人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的影響[A];第十三次全國心血管病學術(shù)會議論文集[C];2011年
3 牛鵬霞;沈鶴;趙書紅;樊斌;;一種RNA干擾載體的構(gòu)建及驗證[A];第十二次全國畜禽遺傳標記研討會論文集[C];2010年
4 張玉稚;王漢森;潘虹;李美蓉;包新華;金靖;吳希如;;大鼠Mecp_2基因的RNA干擾有效序列篩選[A];中華醫(yī)學會第十四次全國兒科學術(shù)會議論文匯編[C];2006年
5 孔祥平;;RNA干擾與乙型肝炎[A];2004年慢性乙型肝炎免疫治療進展學習班論文集[C];2004年
6 姜林娣;王吉耀;王漢洲;趙鳳娣;鮑春德;鄒和建;;RNA干擾抑制COX-2合成以及對類風濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞生物學活性的影響研究[A];第十二屆全國風濕病學學術(shù)會議論文集[C];2007年
7 譚兵;李瑜元;聶玉強;杜艷蕾;;RNA干擾對活化的小鼠巨噬細胞TNFα表達的影響[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年
8 朱t
燕;仇灝;周迎會;吳士良;;一種新型糖基轉(zhuǎn)移酶：β3GalT7基因的RNA干擾表達載體構(gòu)建及其細胞學表型功能的初步研究[A];2008年全國糖生物學學術(shù)會議論文摘要[C];2008年
9 詹鷹;劉繼紅;封江南;肖恒軍;李忠遠;張朝暉;王濤;陳俊;王少剛;葉章群;;腺病毒介導的RNA干擾對人陰莖海綿體平滑肌細胞PDE5基因表達的抑制作用[A];第十六屆全國泌尿外科學術(shù)會議論文集[C];2009年
10 陳敏;何丹;馮九庚;唐容;洪濤;蔣麗萍;;RNA干擾沉默Cx43基因表達抑制血管再狹窄[A];中國藥理學會第十一次全國學術(shù)會議專刊[C];2011年
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2 趙平;RNA干擾抑制結(jié)締組織生長因子對瘢痕疙瘩成纖維細胞功能影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2008年
3 黃捷;RNA干擾熱休克蛋白27基因?qū)ψ园l(fā)性高血壓大鼠血管平滑肌細胞增殖、遷移的影響[D];福建醫(yī)科大學;2009年
4 陳家文;RNA三級結(jié)構(gòu)折疊以及RNA干擾相關(guān)的動力學[D];武漢大學;2013年
5 陳波斌;核酶和RNA干擾靶向治療慢性粒細胞性白血病的實驗研究[D];復旦大學;2003年
6 蔡從利;以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的RNA干擾方法的建立以及凋亡相關(guān)基因HSD11的功能研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2005年
7 梁之聘;多靶位RNA干擾對HIV-1抑制作用的研究[D];南開大學;2014年
8 魏軍民;RNA干擾逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的實驗研究[D];山東大學;2005年
9 孫聰;STAT3特異性短干涉RNA抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖的研究[D];吉林大學;2009年
10 閔安杰;RNA干擾沉默TREM-1對脆弱類桿菌脂多糖炎癥反應的抑制作用及其機制研究[D];中南大學;2007年
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3 王超;Tf-PEG-PEI載RNA干擾質(zhì)粒靶向沉默PC-3細胞核干因子的體外實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年
4 蔣曉芳;抗粗縮病RNA干擾表達載體的構(gòu)建和玉米莖尖生長點原位轉(zhuǎn)化[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2010年
5 李志艷;應用小RNA及RNA干擾研究慢性髓性白血病的致病機理[D];西北農(nóng)林科技大學;2007年
6 戴兆基;RNA干擾介導的抗南方水稻黑條矮縮病毒研究[D];福建農(nóng)林大學;2012年
7 潘彥鵬;慢病毒介導RNA干擾對慢性粒細胞白血病增殖的影響[D];海南大學;2014年
8 劉敏;小干擾RNA對丙型肝炎病毒核心蛋白基因表達的抑制作用[D];第二軍醫(yī)大學;2006年
9 李兵;RNA干擾抑制草魚呼腸孤病毒復制的細胞模型[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2009年
10 楊濤;馬鈴薯淀粉合成酶Ⅲ基因cDNA的克隆及RNA干擾載體的構(gòu)建[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2009年
，
本文編號：2250997
本文鏈接：http://www.lk138.cn/yixuelunwen/waikelunwen/2250997.html
[Abstract]:BACKGROUND: At present, the research of lentivirus-mediated aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 acting on bone marrow mesenchymal stem cells of rheumatoid patients is still in its infancy. Objective: To observe the expression and cell differentiation of the target gene after transfecting aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 gene into bone marrow mesenchymal stem cells. METHODS: Human bone marrow mesenchymal stem cells were cultured in vitro and transfected into the third generation of human bone marrow mesenchymal stem cells with lentiviral vector carrying aggrecanase-1sh RNA, h IGF-1 gene and green fluorescent protein, and the human bone marrow mesenchymal stem cells were transfected with empty vector as negative control group. RESULTS AND CONCLUSION: Human bone marrow mesenchymal stem cells were successfully cultured in vitro, and the target gene was successfully transfected into cells by lentivirus vector. The results were observed under fluorescence microscope. The results of Western blot and confocal laser microscopy showed that the target gene could efficiently and sustainably express the corresponding protein in human bone marrow mesenchymal stem cells, and the changes of cell morphology could indirectly prove aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 gene. It can promote the directional differentiation of human bone marrow stem cells into cartilage.
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3 嚴小虎;常山;田家亮;;RNA干擾治療新進展[J];西南軍醫(yī);2008年04期
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9 李兵;RNA干擾抑制草魚呼腸孤病毒復制的細胞模型[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2009年
10 楊濤;馬鈴薯淀粉合成酶Ⅲ基因cDNA的克隆及RNA干擾載體的構(gòu)建[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2009年
，本文編號：2250997
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