發(fā)布時(shí)間：2020-07-04 22:07

【摘要】：綿馬貫眾為鱗毛蕨科植物粗莖鱗毛蕨(Dryopteris crassirhizoma Nakai)的干燥根莖及葉柄殘基,又名東北貫眾,味苦,性微寒,歸胃、膽經(jīng),有小毒,具有殺菌除蟲(chóng)、清熱解毒、殺菌驅(qū)蟲(chóng)等功效。臨床上主要用于治療流感病毒、原蟲(chóng)真菌感染等疾病。目前綿馬貫眾的研究主要集中在抗瘧、抗腫瘤等方向,而在抑制真菌、細(xì)菌上研究的較少,尤其是對(duì)臨床常見(jiàn)皮膚癬菌的抑制作用研究較少。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),民間藥香鱗毛蕨中的間苯三酚類(lèi)化合物有較好的抑菌作用[60],綿馬貫眾與香鱗毛蕨是同科同屬的植物,富含間苯三酚類(lèi)化合物。因此本文擬對(duì)綿馬貫眾中的間苯三酚類(lèi)化合物富集工藝進(jìn)行優(yōu)化,對(duì)總間苯三酚類(lèi)化合物和各流份進(jìn)行抑菌作用的篩選,對(duì)篩選的有效的流份進(jìn)行化學(xué)成分的分離,并對(duì)得到的化學(xué)成分進(jìn)行真菌和細(xì)菌的抑制作用研究。主要研究?jī)?nèi)容:1、綿馬貫眾間苯三酚化合物的富集:采用正交的方法,以總間苯三酚含量為指標(biāo),篩選總間苯三酚類(lèi)化合物的提取、純化工藝。2、采用M38-A2微量稀釋法,對(duì)總提物及各流份進(jìn)行抑菌作用篩選。篩選其對(duì)紅色毛癬菌、犬小孢子菌、須癬毛癬菌、石膏樣小孢子菌4種真菌,金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌4種細(xì)菌的抑菌活性,測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)。3、采用硅膠、凝膠柱色譜法,半制備液相,重結(jié)晶等方法對(duì)上述篩選的有效流份進(jìn)行化學(xué)成分的分離,根據(jù)單體化合物的理化性質(zhì)、波譜數(shù)據(jù)、顯色反應(yīng)等,解析出化合物結(jié)構(gòu)式。4、采用M38-A2微量稀釋法,對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行抑菌作用的篩選。篩選其對(duì)紅色毛癬菌、犬小孢子菌、須癬毛癬菌、石膏樣小孢子菌4種真菌,金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌4種細(xì)菌的抑菌活性,測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)。主要研究結(jié)果:1、最佳富集工藝為:采用料液比1:15,提取3次,每次24h,浸提。濃縮比例1:8,p H為2.5酸化沉淀。2、總提物及各流份的抑菌活性順序?yàn)?總提物B1D2D1FCB2A,G、H基本無(wú)效。3、從有效流份中分離得到10個(gè)間苯三酚類(lèi)化合物,通過(guò)理化性質(zhì)、顯色以及波譜數(shù)據(jù)分析,鑒定出10個(gè)間苯三酚類(lèi)化合物。分別為:1-(2,4,6-Thihydroxyphenyl)Butan-1-one(Y1),1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl)Butan-1-one(Y2),1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl)Butan-1-one(Y3),1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)-1-Butanone(Y4),Flavaspidic acid AA(黃綿馬酸AA)(Y7),Flavaspidic acid PB(黃綿馬酸PB)(Y5),Norflavaspidic acid AB(Y6),Filixic acid ABA(綿馬酸ABA)(Y8),Flavaspidic acid AB(黃綿馬酸AB)(Y9),Filixic acid ABP(綿馬酸ABP)(Y10)。其中化合物1-(2,4,6-Thihydroxyphenyl)Butan-1-one,1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl)Butan-1-one,1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl)Butan-1-one,1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)-1-Butanone為首次從綿馬貫眾中得到。4、通過(guò)M38-A2方法,對(duì)上述10個(gè)間苯三酚類(lèi)化合物進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。結(jié)果顯示,抑制紅色毛癬菌活性大小順序?yàn)?Filixic acid ABAFlavaspidic acid PB、Norflavaspidic acid AB,其余無(wú)效。抑制須癬毛癬菌活性大小順序?yàn)?Filixic acid ABANorflavaspidic acid AB、Flavaspidic acid AA,其余無(wú)效。抑制石膏樣小孢子菌活性大小順序?yàn)?Filixic acid ABAFlavaspidic acid AA1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)-1-Butanone,其余無(wú)效。抑制犬小孢子菌活性大小順序?yàn)?Filixic acid ABANorflavaspidic acid AB、1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl)Butan-1-oneFlavaspidic acid AAFlavaspidic acid PBFlavaspidic acid AB,其余無(wú)效。抑制金黃色葡萄球菌活性大小順序?yàn)?Filixic acid ABANorflavaspidic acid AB、Filixic acid ABPFlavaspidic acid PB1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl)Butan-1-one、1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl)Butan-1-oneFlavaspidic acid AB,其余無(wú)效。抑制表皮葡萄球菌活性大小順序?yàn)?Filixic acid ABAFilixic acid ABP1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy phenyl-5-methyl)Butan-1-one、Norflavaspidic acid AB1-(3-Acetyl-2,4,6-thihydroxy-phenyl)-1-Butanone、Flavaspidic acid AA、1-(2,4,6-Thihydroxy phenyl-3-methyl)Butan-1-one,其余無(wú)效。分離得到的化合物對(duì)于大腸埃希菌和綠膿桿菌無(wú)效。其中,Filixic acid ABA抑制真菌的作用較好,抑制紅色毛癬菌的MIC為40μg/m L,抑制須癬毛癬菌的MIC為20μg/m L,抑制石膏樣小孢子菌的MIC為40μg/m L,抑制犬小孢子菌的MIC為10μg/m L。Filixic acid ABP和Filixic acid ABA抑制細(xì)菌的作用較好。Filixic acid ABP抑制金黃色葡萄球菌的MIC為20μg/m L,抑制表皮葡萄球菌的MIC為20μg/m L。Filixic acid ABA抑制金黃色葡萄球菌的MIC為2.5μg/m L,抑制表皮葡萄球菌的MIC為2.5μg/m L。陽(yáng)性藥頭孢西丁抑制金黃色葡萄球菌的MIC為4μg/m L,陽(yáng)性藥頭孢西丁抑制表皮葡萄球菌的MIC為16μg/m L。Filixic acid ABA抑制金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的效果與陽(yáng)性藥相當(dāng)。結(jié)論:優(yōu)化了綿馬貫眾中總間苯三酚類(lèi)化合物的富集工藝。從有效流份中分離得到10個(gè)間苯三酚類(lèi)化合物,其中有4個(gè)是在綿馬貫眾中首次分離得到。Filixic acid ABA抑制真菌、細(xì)菌作用較好,可為后續(xù)進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新藥奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R284;R285
【圖文】：

化合物Y3的13C-NMR譜

化合物Y3的1H-NMR譜

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2741658