【摘要】：膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率均居泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中首位,嚴(yán)重危害世界各國(guó)人民的生命和健康。盡管75%的膀胱癌患者屬于5年生存率較高的非肌層浸潤(rùn)膀胱癌(non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC),另外25%的患者屬于肌層浸潤(rùn)膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)且在首次治療后容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),全球每年膀胱腫瘤患者的死亡病例數(shù)超過(guò)15萬(wàn)人,形勢(shì)極其嚴(yán)峻。目前臨床上對(duì)于膀胱癌的治療主要采用全膀胱手術(shù)切除為主,但術(shù)后復(fù)發(fā)率仍然很高,效果并不理想。因此,深入了解膀胱癌形成的分子機(jī)制,完善針對(duì)不同膀胱癌患者特異的診斷及治療方法,尋找膀胱癌特有的分子診斷標(biāo)志物,以實(shí)現(xiàn)基因靶向診治。從而降低膀胱癌患者的發(fā)病率和死亡率,提高患者術(shù)后5年的生存率及生存質(zhì)量,是當(dāng)今醫(yī)學(xué)需要解決的難題。跨膜蛋白40(TMEM40)是一個(gè)大小為34 kDa,由233個(gè)氨基酸構(gòu)成且含有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的跨膜蛋白。在我們前期的研究中發(fā)現(xiàn),TMEM40在膀胱腫瘤中表達(dá)上調(diào),預(yù)測(cè)它可能是一個(gè)潛在的促癌基因。目前,人們對(duì)于TMEM40與膀胱癌的關(guān)系仍知之甚少,TMEM40在膀胱癌的預(yù)后、診斷及治療等方面的作用仍需要更進(jìn)一步研究。首先,在當(dāng)前的研究中我們通過(guò)qRT-PCR及WB檢測(cè)了膀胱癌細(xì)胞及組織中TMEM40在mRNA及蛋白水平的表達(dá),結(jié)果表明TMEM40在膀胱癌細(xì)胞與組織中表達(dá)均上調(diào);其次,通過(guò)組織芯片的免疫組化實(shí)驗(yàn),探究TMEM40表達(dá)水平高低與膀胱癌患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在115例膀耽癌患者組織中,TMEM40的表達(dá)與患者的臨床分期、pT分期、組織病理學(xué)分級(jí)具有明顯的相關(guān)性,而與患者的年齡、性別等無(wú)顯著相關(guān)。接著,我們選取兩株人膀胱癌細(xì)胞系(5637、EJ),采用不同濃度梯度的G418篩選TMEM40過(guò)表達(dá)及敲減的膀胱癌細(xì)胞,擴(kuò)大培養(yǎng)來(lái)得到穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。最后,通過(guò)CCK-8、EdU、Transwell、細(xì)胞周期、凋亡及裸鼠皮下成瘤等一系列功能實(shí)驗(yàn),來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證TMEM40對(duì)膀胱癌惡性表型的影響。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,TMEM40表達(dá)上調(diào)促進(jìn)細(xì)胞的增殖,而TMEM40下調(diào)則在一定程度上抑制了細(xì)胞的增殖;Transwell實(shí)驗(yàn)表明,TMEM40表達(dá)上調(diào)促進(jìn)細(xì)胞遷移、侵襲,而TMEM40敲減則抑制細(xì)胞遷移、侵襲;流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)TMEM40對(duì)細(xì)胞的凋亡具有一定的抑制作用,而敲減TMEM40則促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡;過(guò)表達(dá)TMEM40加快G1/S期變,而敲減TMEM40則細(xì)胞周期阻滯在G1期。此外,裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,敲減TMEM40能夠明顯抑制裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)。本研究表明,TMEM40在膀胱癌組織及細(xì)胞中高表達(dá),其表達(dá)水平與膀胱癌的遷移、侵襲、增殖等惡性表型密切相關(guān),過(guò)表達(dá)TMEM40使p53、p21 Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Cleaved-PARP1 表達(dá)下調(diào),c-myc、CCND1表達(dá)上調(diào),從而抑制5637和EJ細(xì)胞的凋亡并加快G1/S轉(zhuǎn)變。因此,TMEM40在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用,有可能成為膀胱癌患者臨床治療的基因靶點(diǎn)及分子標(biāo)志物。
【圖文】：

Ｉｍａｇｅ邋Ｊ軟件對(duì)蛋白條帶灰度值定量后，，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ與逡逑ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果基本保持一致，即同癌旁組織相比，在膀胱癌組織中ＴＭＥＭ４０逡逑蛋白表達(dá)水平上調(diào)，Ｐ＜0．０５，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意NB。（如圖１＿２所７Ｋ）。逡逑Ｎ１邋Ｔ１邋Ｎ２邋Ｔ２邋Ｎ３邋Ｔ３邋Ｎ４邋Ｔ４邋Ｎ５邋Ｔ５邋Ｎ６邋Ｔ６逡逑ＴＭＥＭ４０邋遍~|一邋｜ａ邐■邋—邋Ｓ邋—丨}0日逡逑ＧＡＰＤＨ邐＿邐＿？

本文編號(hào)：2649407