自噬與腫瘤的發(fā)生有著密切的關(guān)系.通過防止受損蛋白質(zhì)和細胞器的毒性積累,自噬限制氧化應(yīng)激、慢性組織損傷和致癌信號傳導(dǎo),抑制癌癥的發(fā)生,這表明了自噬激活在癌癥預(yù)防和治療中的作用.研究發(fā)現(xiàn)一種新的咪唑,命名為NO.143.利用胰腺癌細胞PANC-1為模型,用MTS檢測不同濃度NO.143對細胞活力的影響,共聚焦顯微鏡觀察自噬熒光點,Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白LC3B、ATG13、p62的表達情況,以及AMPK/mTOR信號通路相關(guān)蛋白的表達情況.結(jié)果表明,NO.143呈現(xiàn)濃度依賴性地抑制腫瘤細胞的增殖. NO.143能夠明顯增加細胞中自噬熒光斑點、LC3B表達、ATG13的含量和p62的降解,表明NO.143能夠顯著上調(diào)腫瘤細胞的自噬.進一步研究顯示,NO.143能夠增加AMPKα的磷酸化水平,降低哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和S6的磷酸化水平.相反的,在抑制AMPKα活性后,這種現(xiàn)象發(fā)生逆轉(zhuǎn).這些結(jié)果都可能表明NO.143通過AMPK/mTOR信號傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)腫瘤自噬,抑制腫瘤細胞的增殖.

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【部分圖文】：

圖1NO.143的結(jié)構(gòu)

自噬相關(guān)基因(Atg)控制自噬過程[9-10].這些Atg基因的產(chǎn)物受到哺乳動物雷帕霉素靶蛋白mTOR,能量敏感因子AMPK和缺氧誘導(dǎo)因子HIFs傳感機制的影響打開和關(guān)閉[11-12].自噬的分子機制復(fù)雜且高度保守.目前,已發(fā)現(xiàn)mTOR信號傳導(dǎo)途徑和磷酸肌醇-3-激酶途徑....

圖2NO.143對腫瘤細胞增殖的影響

使用Origin8軟件進行統(tǒng)計.獲得至少3次獨立實驗的所有數(shù)據(jù),并表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(S.D.).使用單因素方差分析(ANOVA)分析數(shù)據(jù)以確定不同組之間的顯著差異.P值<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義.3結(jié)果與討論

圖310μmol/L的NO.143處理PANC-1細胞8h后細胞內(nèi)熒光自噬斑點的變化

自噬發(fā)生時,LC3會參與自噬體的形成,用表達GFP-LC3的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PANC-1細胞并監(jiān)測自噬體的形成.對照組和NO.143治療組,在PANC-1細胞中都可檢測到典型的GFP-LC3陽性結(jié)構(gòu).NO.143處理組的熒光自噬斑點遠遠多于對照組(圖3).免疫印跡分析揭示了在PAN....

圖5mTOR信號通路中不同蛋白表達量的變化

如圖5所示,與空白對照組相比,用NO.143處理的細胞中磷酸化的AMPKα含量在短時間內(nèi)顯著增加,8h后恢復(fù)到正常水平.作為AMPKα的下游靶蛋白,隨著磷酸化AMPKα的增加,mTOR的磷酸化水平也顯著降低.同時,mTOR下游蛋白的S6和4ebp1的磷酸化水平也被顯著抑制(....

本文編號：4001775