自噬與腫瘤的發(fā)生有著密切的關(guān)系.通過(guò)防止受損蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的毒性積累,自噬限制氧化應(yīng)激、慢性組織損傷和致癌信號(hào)傳導(dǎo),抑制癌癥的發(fā)生,這表明了自噬激活在癌癥預(yù)防和治療中的作用.研究發(fā)現(xiàn)一種新的咪唑,命名為NO.143.利用胰腺癌細(xì)胞PANC-1為模型,用MTS檢測(cè)不同濃度NO.143對(duì)細(xì)胞活力的影響,共聚焦顯微鏡觀察自噬熒光點(diǎn),Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3B、ATG13、p62的表達(dá)情況,以及AMPK/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況.結(jié)果表明,NO.143呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖. NO.143能夠明顯增加細(xì)胞中自噬熒光斑點(diǎn)、LC3B表達(dá)、ATG13的含量和p62的降解,表明NO.143能夠顯著上調(diào)腫瘤細(xì)胞的自噬.進(jìn)一步研究顯示,NO.143能夠增加AMPKα的磷酸化水平,降低哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和S6的磷酸化水平.相反的,在抑制AMPKα活性后,這種現(xiàn)象發(fā)生逆轉(zhuǎn).這些結(jié)果都可能表明NO.143通過(guò)AMPK/mTOR信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)腫瘤自噬,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖.

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【部分圖文】：

圖1NO.143的結(jié)構(gòu)

自噬相關(guān)基因(Atg)控制自噬過(guò)程[9-10].這些Atg基因的產(chǎn)物受到哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白mTOR,能量敏感因子AMPK和缺氧誘導(dǎo)因子HIFs傳感機(jī)制的影響打開(kāi)和關(guān)閉[11-12].自噬的分子機(jī)制復(fù)雜且高度保守.目前,已發(fā)現(xiàn)mTOR信號(hào)傳導(dǎo)途徑和磷酸肌醇-3-激酶途徑....

圖2NO.143對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響

使用Origin8軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì).獲得至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的所有數(shù)據(jù),并表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(S.D.).使用單因素方差分析(ANOVA)分析數(shù)據(jù)以確定不同組之間的顯著差異.P值<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.3結(jié)果與討論

圖310μmol/L的NO.143處理PANC-1細(xì)胞8h后細(xì)胞內(nèi)熒光自噬斑點(diǎn)的變化

自噬發(fā)生時(shí),LC3會(huì)參與自噬體的形成,用表達(dá)GFP-LC3的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PANC-1細(xì)胞并監(jiān)測(cè)自噬體的形成.對(duì)照組和NO.143治療組,在PANC-1細(xì)胞中都可檢測(cè)到典型的GFP-LC3陽(yáng)性結(jié)構(gòu).NO.143處理組的熒光自噬斑點(diǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于對(duì)照組(圖3).免疫印跡分析揭示了在PAN....

圖5mTOR信號(hào)通路中不同蛋白表達(dá)量的變化

如圖5所示,與空白對(duì)照組相比,用NO.143處理的細(xì)胞中磷酸化的AMPKα含量在短時(shí)間內(nèi)顯著增加,8h后恢復(fù)到正常水平.作為AMPKα的下游靶蛋白,隨著磷酸化AMPKα的增加,mTOR的磷酸化水平也顯著降低.同時(shí),mTOR下游蛋白的S6和4ebp1的磷酸化水平也被顯著抑制(....

本文編號(hào)：4001775