本文設(shè)計了一個合成細胞內(nèi)溶酶體定位的NO熒光探針并進行細胞成像的本科藥物化學實驗。首先，將可對NO響應的熒光物質(zhì)進行結(jié)構(gòu)修飾，通過一定的連接方式將溶酶體定位基團引入熒光物質(zhì)中，合成了新型NO熒光探針；其次，對所合成的探針進行簡單的體外性能測試，通過對NO溶液滴定的熒光、吸收光譜的分析以及對不同p H值和不同生物分子的熒光響應情況的評估，揭示了該探針的高靈敏度、高選擇性；最后，通過細胞成像實驗，證實了探針能選擇性檢測溶酶體內(nèi)的內(nèi)源性的NO。將該實驗引入到藥物化學實驗教學中，可以提升學生的實驗操作能力，了解當前藥物化學實驗的前沿研究方向，增強學生的科研素養(yǎng)，為其將來更好地從事藥物化學相關(guān)的研究打下基礎(chǔ)。

 

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文章目錄

 

1 實驗目的

2 實驗原理

3 實驗藥品和儀器

    3.1 藥品

    3.2 儀器

4 實驗步驟

    4.1 探針LysoNO-DCM的合成

        4.1.1 DCM-COOH的合成

        4.1.2 LysoNO-DCM的合成

    4.2 探針體外活性分析

        4.2.1 各類儲備液的制備

        4.2.2 體外NO作用的光譜檢測

    4.3 探針的細胞成像實驗

        4.3.1 細胞培養(yǎng)

        4.3.2 探針的細胞溶酶體定位能力的評估

        4.3.3 探針對內(nèi)源性NO的成像能力評估

5 結(jié)果與分析

    5.1 探針的結(jié)構(gòu)分析

    5.2 體外檢測數(shù)據(jù)分析

        5.2.1 探針的NO濃度依賴性的熒光響應和檢測限評估

        5.2.2 pH環(huán)境對熒光響應的影響

        5.2.3 NO檢測的選擇性評價

    5.3 細胞成像實驗

        5.3.1 探針的細胞溶酶體定位實驗

        5.3.2 探針監(jiān)測內(nèi)源性NO的細胞成像實驗

6 實踐總結(jié)

7 教學建議