目的：本實驗主要研究Ovo12基因對肺腺癌細胞上皮一間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition,以下簡稱EMT)過程及其侵襲力、遠處轉移能力的影響,并進一步探討其中可能存在的分子機制,以期為肺腺癌的靶向治療提供一定的理論基礎。方法：第一部分實驗我們以臨床手術切除標本為基礎,通過免疫組化(Immunohistochemistry)實驗,我們檢測不同分期、不同分化程度及癌旁組織中Ovo12蛋白的表達水平,明確Ovo12的表達水平是否會有差異。第二部分細胞學實驗均通過培養(yǎng)肺腺癌細于體外完成。培養(yǎng)肺腺癌細胞株A549,通過構建并感染PLV-BSD-Ovol2(過表達Ovo12)及PLV-BSD-Control慢病毒形成實驗組(過表達Ovol2)和對照組；首先,通過實時熒光定量PCR實驗(Quant it ative Real-time PCR,以下簡稱Real-time PCR)檢測實驗組、對照組細胞中與EMT相關基因的mRNA表達水平變化,明確Ovo12過表達后是否能夠在mRNA水平抑制抑制與EMT相關基因的表達；進一步,我們采用Western-Blot蛋白印記實驗檢測上皮細胞與間充質細胞的相關標記蛋白,如E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、 N-鈣黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)等的蛋白表達水平,從而進一步明確是否被Ovol2所抑制；更進一步,我們通過染色質免疫共沉淀實驗(Chromatin immunoprecipitation,以下簡稱ChIP)、熒光素酶實驗(Luciferase Reporter Gene Assays,以下簡稱LUC實驗)及拯救實驗(rescue實驗)來進一步探究其可能的分子機制。最后,我們通過劃痕實驗(Wound Healing)及侵襲實驗(Transwell)比較實驗組和對照組細胞的轉移和侵襲能力的變化,從直觀上直接觀察細胞侵襲及轉移能力的變化。結果：Ovol2基因過表達后,不論在mRNA還是在蛋白表達水平,E-鈣黏蛋白表達上升,N-鈣黏蛋白及波形蛋白表達下降；如若進一步同時將被Ovo12基因明顯抑制的轉錄因子Twistl過表達后,這種抑制作用會被部分抵消。而且,Ovo12可以直接結合與轉錄因子Twist1的啟動子序列,從而來調控(抑制)其表達,這種抑制作用是一種劑量依賴性的；最后肺癌細胞的轉移和侵襲能力也相應的被抑制。結論：Ovo12基因可以通過直接抑制轉錄因子Twistl的表達來抑制肺腺癌細胞的EMT過程,從而抑制其遠處轉移及侵襲力。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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本文編號：1560635