血管生成素樣蛋白家族(Angiopoietin-like proteins,ANGPTLs)是一類分泌型蛋白因子,參與血管生成、脂質(zhì)合成、葡萄糖代謝及胰島素敏感性等生理狀況的調(diào)控。其家族成員ANGPTL8能通過抑制脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)的活性,調(diào)節(jié)血液中甘油三酯(Triglyceride,TG)含量,影響脂肪組織對(duì)甘油三酯的轉(zhuǎn)運(yùn)與吸收,進(jìn)而影響脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)積累。ANGPTL8的含量與高血脂癥、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)。目前,關(guān)于ANGPTL8調(diào)控前體脂肪細(xì)胞分化與脂質(zhì)沉積的分子機(jī)制尚不清楚。因此,本研究在建立牛前體脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)上,利用腺病毒介導(dǎo)的過表達(dá)與慢病毒介導(dǎo)基因沉默技術(shù),研究ANGPTL8影響牛脂肪沉積的作用機(jī)理。同時(shí),在轉(zhuǎn)錄水平上初步探索ANGPTL8的表達(dá)調(diào)控模式,揭示其潛在的成脂相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。主要研究結(jié)果有:1.通過qRT-PCR技術(shù)對(duì)ANGPTL8基因的表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn),ANGPTL8基因在成年牛的心、肝、腎、小腸、肌肉、脂肪組織中均有表達(dá),脂肪組織的表達(dá)豐度顯著高于其他組織;通過組織塊法培養(yǎng)牛原代前體脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)分化過程中ANGPTL8表達(dá)水平隨脂肪細(xì)胞分化成熟過程顯著升高,其表達(dá)模式與脂蛋白脂酶(LPL)表達(dá)趨勢(shì)一致。2.過表達(dá)ANGPTL8的牛前體脂肪細(xì)胞油紅O染色結(jié)果表明,過表達(dá)ANGPTL8將導(dǎo)致細(xì)胞脂質(zhì)積累能力顯著增強(qiáng),并將顯著降低誘導(dǎo)過程中SREBP1、LPL基因的表達(dá)量,但對(duì)脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志基因PPARγ、C/EBPα沒有顯著性影響。3.克隆獲得牛ANGPTL8基因上游啟動(dòng)子區(qū)不同缺失片段,雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果表明,ANGPTL8核心啟動(dòng)子區(qū)為-522~-885區(qū)域。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),ANGPTL8基因啟動(dòng)子區(qū)存在PPARγ、SREBP1、C/EBPα、Znf423轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),SREBP1與PPARγ結(jié)合區(qū)域缺失片段啟動(dòng)子活性顯著降低,提示SREBP1與PPARγ能促進(jìn)ANGPTL8基因轉(zhuǎn)錄。綜上所述,本研究成功建立了牛前體脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)及誘導(dǎo)方法,獲得了ANGPTL8組織與細(xì)胞表達(dá)譜,并構(gòu)建了ANGPTL8過表達(dá)與干擾病毒載體,初步確定ANGPTL8基因促進(jìn)牛前體脂肪細(xì)胞脂質(zhì)積累,ANGPTL8基因的表達(dá)受SREBP1與PPARγ轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控,本研究結(jié)果為探究ANGPTL8調(diào)控前體脂肪細(xì)胞分化與脂質(zhì)沉積的機(jī)制提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：信陽師范學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：Q953
【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 脂肪組織的形成過程
    1.2 脂肪細(xì)胞分化過程調(diào)控機(jī)制
        1.2.1 生長抑制
        1.2.2 克隆增殖
        1.2.3 早期分化
        1.2.4 終末分化
    1.3 脂肪細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的信號(hào)通路
        1.3.1 過氧化物酶增殖物激活受體γ（PPARγ）
        1.3.2 CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族（C/EBPs）
        1.3.3 脂蛋白脂肪酶（LPL）
    1.4 ANGPTLS家族
        1.4.1 Angptls與甘油三酯代謝
        1.4.2 ANGPTL8與脂肪組織的形成
    1.5 脂肪細(xì)胞分化的研究模型
        1.5.1 前脂肪細(xì)胞系
        1.5.2 原代前體脂肪培養(yǎng)技術(shù)
    1.6 研究目的與意義
第二章 牛ANGPTL8基因組織與原代前體脂肪細(xì)胞表達(dá)特性分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 牛前體脂肪細(xì)胞培養(yǎng)觀察
        2.2.2 牛原代前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化油紅O染色
        2.2.3 RNA提取和質(zhì)檢
        2.2.4 脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因的定量檢測(cè)
        2.2.5 牛ANGPTL8組織表達(dá)特征
        2.2.6 原代脂肪細(xì)胞ANGPTL8誘導(dǎo)不同階段表達(dá)特征
    2.3 討論
第三章 牛ANGPTL8基因?qū)χ境练e的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 過表達(dá)ANGPTL8前體脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.2 過表達(dá)ANGPTL8對(duì)牛脂肪細(xì)胞分化的影響
    3.3 討論
第四章 牛ANGPTL8基因啟動(dòng)子活性分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 生物信息學(xué)分析ANGPTL8啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)
        4.2.2 牛ANGPTL8基因啟動(dòng)子片段的PCR克隆
        4.2.3 pGL3-ANGPTL8啟動(dòng)子報(bào)告基因構(gòu)建
        4.2.4 ANGPTL8基因啟動(dòng)子片段的轉(zhuǎn)錄活性
        4.2.5 Insulin/IBMX處理對(duì)ANGPTL8啟動(dòng)子片段轉(zhuǎn)錄活性影響
    4.3 討論
結(jié)論
下一步開展的工作
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 Silvia I Anghel;Walter Wahli;;Fat poetry: a kingdom for PPARγ[J];Cell Research;2007年06期

本文編號(hào)：2889496