發(fā)布時間：2020-12-04 04:36

　　目的:運用一株胃癌細(xì)胞AGS,將其分為shCtrl（對照組）及shHEATR1（目標(biāo)組）,運用細(xì)胞功能學(xué)實驗檢測HEATR-1（HEATR repeat containing-1）基因?qū)τ谀[瘤細(xì)胞增殖的相關(guān)作用,當(dāng)其在慢病毒感染并敲除目的基因后,觀察正常兩組之間的細(xì)胞增殖是否受到抑制。方法:根據(jù)在基因庫中檢索HEATR-1的mRNA核苷酸序列,設(shè)計、目的基因慢病毒載體構(gòu)建。培養(yǎng)生長狀態(tài)良好的目的細(xì)胞,依據(jù)相關(guān)要求設(shè)計好實驗條件后進(jìn)行病毒感染。依據(jù)預(yù)實驗確定的感染時間點,在一定熒光條件下顯微觀察GFP表達(dá)水平,細(xì)胞匯合度達(dá)80%左右收集細(xì)胞進(jìn)入下游實驗。經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測胃癌細(xì)胞株AGS目的基因表示水平,確定高表達(dá)后,在慢病毒感染目標(biāo)組之后行Q-PCR檢測HEATR-1的mRNA表達(dá)水平確認(rèn)敲除效率。并對shCtrl（對照組）及shHEATR1（目標(biāo)組）行MTT檢測,評估HEATR-1敲除后對細(xì)胞增殖功能的影響,探討HEATR-1陽性表達(dá)與胃癌組織增殖的關(guān)系。結(jié)果:對照及目的慢病毒感染目的細(xì)胞后72小時于顯微鏡下熒光觀察,觀察結(jié)果顯示細(xì)胞感染效率達(dá)到80%以上細(xì)胞狀態(tài)正常。熒光定量PC... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HEATR1在兩組胃癌細(xì)胞中mRNA敲除量從圖1定量PCR結(jié)果可以看出，經(jīng)shRNA慢病毒感染后實驗AGS細(xì)胞中HEATR1基因在mRNA水平的表達(dá)量受到抑制（p<0.05），敲減效率達(dá)到89.5%;

圖 1 HEATR1 在兩組胃癌細(xì)胞中 mRNA 敲除量從圖 1 定量 PCR 結(jié)果可以看出，經(jīng) shRNA 慢病毒感染后實驗 AGS 細(xì)胞中 HEATR1基因在 mRNA 水平的表達(dá)量受到抑制（p<0.05），敲減效率達(dá)到 89.5%。


本文編號：2897021