發(fā)布時(shí)間：2025-02-11 17:49

　　目的:通過特異的si RNA構(gòu)建Sp110表達(dá)降低的細(xì)胞模型,在此基礎(chǔ)上研究Sp110對(duì)結(jié)核桿菌感染后的巨噬細(xì)胞的影響,以便為促進(jìn)抗結(jié)核基因的轉(zhuǎn)基因合成以及發(fā)現(xiàn)治療結(jié)核病的新方法奠定基礎(chǔ)。方法:利用Lipofectamin TM3000 Reagent包裹si RNA對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞中Sp110基因m RNA水平的表達(dá)量,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行總蛋白的提取,利用Western Blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后巨噬細(xì)胞中SP110蛋白的表達(dá)情況。成功構(gòu)建Sp110低表達(dá)的巨噬細(xì)胞后,分別用BCG、H37Ra感染巨噬細(xì)胞,于感染6 h后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗,去除細(xì)胞外的結(jié)核桿菌并將此時(shí)記為0h。利用抗酸染色分析巨噬細(xì)胞吞噬結(jié)核桿菌的情況,選取0 h、24 h、48 h、72 h四個(gè)時(shí)間段繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線以了解增殖情況,利用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞死亡情況。結(jié)果:(1)si RNA轉(zhuǎn)染24h后,陰性對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)與空白對(duì)照相比未發(fā)生明顯變化,細(xì)胞胞體呈圓形,折光性強(qiáng),胞內(nèi)顆粒少;si RNA組細(xì)胞胞體出現(xiàn)觸角,胞漿中黑色顆粒增多;(2)經(jīng)轉(zhuǎn)染si RNA24 h后,與空白對(duì)照組...

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1RAW264.7細(xì)胞形態(tài)變化（×100）

Sp110基因沉默對(duì)巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌的影響及功能研究14結(jié)果1.siRNA轉(zhuǎn)染24h后RAW264.7細(xì)胞變化在細(xì)胞進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染24h后，觀察細(xì)胞形態(tài)，結(jié)果可見三組的細(xì)胞數(shù)量接近，沒有明顯的改變，NC組細(xì)胞形態(tài)相較于Control組未發(fā)生明顯變化，顯微鏡下可見細(xì)胞的胞....

圖3Sp110基因?qū)��?xì)胞中SP110蛋白表達(dá)的影響

Sp110基因沉默對(duì)巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌的影響及功能研究150.001）。NC組與Control組相比蛋白表達(dá)量雖然有些許增加但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（見圖3）。（a）（b）圖3Sp110基因?qū)��?xì)胞中SP110蛋白表達(dá)的影響Figure3InfluenceofSp110g....

圖4結(jié)核桿菌感染RAWFigure4RAW264.7cellsinfectedby注：圖A與圖B組為BCG感染的NC-1組和siRNA-1組

Sp110基因沉默對(duì)巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌的影響及功能研究150.001）。NC組與Control組相比蛋白表達(dá)量雖然有些許增加但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（見圖3）。（a）（b）圖3Sp110基因?qū)��?xì)胞中SP110蛋白表達(dá)的影響Figure3InfluenceofSp110g....

本文編號(hào)：4033629