肺炎克雷伯氏菌是重要的條件致病菌,可導致林麝肺炎,從而引起死亡。肺炎克雷伯氏菌中的LysR型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子可參與調(diào)控其毒力、分解代謝、耐藥性等。本研究通過構(gòu)建林麝源肺炎克雷伯氏菌GPKP中新發(fā)現(xiàn)的LysR型轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的缺失株及回補株,比較三者的生長曲線、藥敏試驗、生物被膜、抗逆性、細菌半數(shù)致死量、定殖能力及其引起的器官病理形態(tài)學等生物學特性的差異,探究該轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的基本功能,主要試驗結(jié)果如下:1.林麝源肺炎克雷伯氏菌基因kp05372缺失株及回補株的構(gòu)建:擴增基因kp05372上下游同源臂,交疊PCR獲得融合片段,以pLP12T質(zhì)粒為載體,通過無縫克隆連接,成功構(gòu)建重組自殺質(zhì)粒。通過接合轉(zhuǎn)移,在氯霉素壓力正向篩選及阿拉伯糖誘導反向篩選下,經(jīng)兩次同源重組,最終成功篩選到缺失株GPKP-△kp05372。以質(zhì)粒pBAD33為載體克隆連接敲除基因片段kp05372,成功構(gòu)建回補表達質(zhì)粒pBAD33-KP。通過接合轉(zhuǎn)移,阿拉伯糖誘導調(diào)節(jié)基因表達量,成功篩選到回補株GPKP-△kp05372⁺。2.林麝源肺炎克雷伯氏菌生物學特性分析:三株菌生長速率無顯著差異,均表現(xiàn)為2 h...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 文獻綜述及研究目的和意義
    1 林麝的研究概況
        1.1 林麝的現(xiàn)狀
        1.2 林麝常見疾病的研究現(xiàn)狀
    2 肺炎克雷伯氏菌的生物學特征研究概況
        2.1 病原學
        2.2 流行病學
        2.3 耐藥機制
        2.4 致病性
    3 LysR型轉(zhuǎn)錄因子研究進展
        3.1 LysR型轉(zhuǎn)錄因子的基本結(jié)構(gòu)特征
        3.2 LysR蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控模式
        3.3 LysR家族轉(zhuǎn)錄因子的主要功能
        3.4 肺炎克雷伯氏菌中的LysR家族轉(zhuǎn)錄因子
    4 肺炎克雷伯氏菌基因缺失技術概況
        4.1 λ Red重組技術
        4.2 自殺載體同源重組技術
        4.3 插入突變基因技術
    5 研究的目的與意義
第二部分 研究內(nèi)容
    第一章 林麝源肺炎克雷伯氏菌GPKP基因KP05372 缺失株GPKP-△KP05372 及回補株GPKP-△KP05372+的構(gòu)建
        1 試驗材料
            1.1 主要菌株及質(zhì)粒
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 缺失株及回補株引物設計
            2.2 pLP12-KP自殺質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.3 林麝GPKP-△kp05372 缺失株的構(gòu)建
            2.4 pBAD33-KP回補表達質(zhì)粒構(gòu)建
            2.5 林麝GPKP-△kp05372+回補株的構(gòu)建
        3 試驗結(jié)果
            3.1 pLP12-KP自殺質(zhì)粒的構(gòu)建
            3.2 林麝GPKP-△kp05372 缺失株的構(gòu)建
            3.3 pBAD33-KP回補表達質(zhì)粒構(gòu)建
            3.4 林麝GPKP-△kp05372⁺回補株的構(gòu)建
        4 討論
    第二章 林麝源肺炎克雷伯氏菌基因缺失株、回補株及野生株生物學特性對比研究.
        1 試驗材料
            1.1 主要菌株及試驗動物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 生長曲線測定
            2.2 藥敏試驗
            2.3 生物被膜檢測
            2.4 抗逆性的檢測
            2.5 細菌半數(shù)致死量LD₅₀ 檢測
            2.6 細菌定殖能力檢測
            2.7 組織病理學觀察試驗
        3 試驗結(jié)果
            3.1 生長曲線測定
            3.2 藥敏試驗
            3.3 生物被膜檢測
            3.4 抗逆性的檢測
            3.5 細菌半數(shù)致死量LD₅₀ 檢測
            3.6 細菌定殖能力檢測
            3.7 組織病理學觀察
        4 討論
            4.1 生長速率
            4.2 生物被膜
            4.3 藥敏試驗
            4.4 抗逆性
            4.5 細菌半數(shù)致死量 LD50

            4.6 細菌定殖能力
            4.7 組織病理學觀察
第三部分 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄
作者簡歷



本文編號：4047453

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