為更加準確了解河西走廊地區(qū)鹽堿土壤中放線菌種群結構及其多樣性信息。提取鹽堿土樣微生物總DNA,用放線菌特異性引物擴增16S rRNA基因片段,構建土壤放線菌16S rRNA基因克隆文庫,用HaeⅢ和HhaⅠ兩種限制性內切酶進行酶切分析,對酶切帶型不同的菌液進行測序,并進行多樣性和系統(tǒng)發(fā)育分析。研究結果表明:通過4種方法對鹽堿土微生物總DNA進行提取比較,CaCl2-SDS-酶解法是一種最適于河西走廊鹽堿土壤微生物總DNA的提取方法。對河西走廊鹽堿土中放線菌多樣性指數(shù)進行分析,疏勒河流域土樣中放線菌多樣性為原生>次生>農田;黑河流域土樣中放線菌多樣性為次生>原生;石羊河流域土樣中放線菌多樣性為次生>原生>農田。通過對河西走廊地區(qū)土樣中放線菌的16S rRNA基因序列進行系統(tǒng)發(fā)育分析,結果表明:疏勒河流域原生鹽堿土(S1)中放線菌分屬于微球菌亞目、丙酸桿菌亞目、棒狀桿菌亞目、弗蘭克氏菌亞目、假諾卡氏菌亞目共5個亞目和放線菌未知類群;次生鹽堿土(S2)中放線菌分屬于微球菌亞目和丙酸桿菌亞目共2個亞目和放線菌未知類群;農田土(S3)中放線菌分屬于微球菌亞目和棒狀桿菌...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 放線菌
        1.1.1 放線菌概述
        1.1.2 鹽堿環(huán)境放線菌研究現(xiàn)狀及意義
    1.2 鹽堿土壤微生物多樣性研究方法
        1.2.1 鹽堿土壤微生物多樣性含義
            1.2.1.1 物種多樣性
            1.2.1.2 遺傳多樣性
            1.2.1.3 功能多樣性
        1.2.2 鹽堿土壤微生物多樣性的研究方法
            1.2.2.1 傳統(tǒng)的微生物平板純培養(yǎng)法
            1.2.2.2 生物化學方法
            1.2.2.3 分子生物學方法
    1.3 放線菌分類學研究
        1.3.1 國外分類學進展
        1.3.2 國內分類學進展
        1.3.3 多相分類研究
    1.4 展望
    1.5 本研究目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 土壤樣品采集及處理
        2.1.2 主要試劑與器材
            2.1.2.1 主要試劑
            2.1.2.2 主要儀器
            2.1.2.3 引物
            2.1.2.4 培養(yǎng)基
    2.2 研究方法
        2.2.1 土壤微生物總DNA提取方法優(yōu)化
            2.2.1.1 方法一(Omega試劑盒法)
            2.2.1.2 方法二(MoBio試劑盒法)
            2.2.1.3 方法三(CTAB-SDS法)
            2.2.1.4 方法四(CaCl2-SDS-酶解法)
            2.2.1.5 土壤DNA純度及濃度的檢測
        2.2.2 放線菌 16S rRNA基因的PCR擴增及純化
            2.2.2.1 第一輪PCR擴增
            2.2.2.2 第二輪PCR擴增
            2.2.2.3 Reconditioning PCR擴增
        2.2.3 PCR產物純化
        2.2.4 目的基因與載體連接
        2.2.5 轉化
        2.2.6 陽性克隆篩選
        2.2.7 16S rRNA基因擴增片段限制性內切酶分析(ARDRA)及測序
        2.2.8 系統(tǒng)發(fā)育分析及序列登錄號
        2.2.9 數(shù)據(jù)處理
第三章 結果與分析
    3.1 土壤總DNA提取方法優(yōu)化及 16S rRNA基因PCR擴增
    3.2 ARDRA分析
    3.3 多樣性指數(shù)分析
        3.3.1 河西走廊各地區(qū)土壤放線菌多樣性指數(shù)分析
        3.3.2 河西走廊鹽堿土壤中放線菌多樣性指數(shù)分析
    3.4 系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.4.1 疏勒河流域地區(qū)鹽堿土壤中放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.4.2 黑河流域地區(qū)鹽堿土壤中放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.4.3 石羊河流域地區(qū)鹽堿土壤中放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.4.4 河西走廊地區(qū)鹽堿土壤中放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
第四章 討論
第五章 結論
    5.1 DNA提取方法優(yōu)化
    5.2 放線菌多樣性指數(shù)分析
    5.3 放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
        5.3.1 疏勒河流域放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
        5.3.2 黑河流域放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
        5.3.3 石羊河流域放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
        5.3.4 河西走廊地區(qū)不同類型土壤中放線菌系統(tǒng)發(fā)育分析
參考文獻
參與項目與科研成果
致謝



本文編號：4050184