香蕉枯萎病是困擾熱帶香蕉行業(yè)多年的難題。香蕉枯萎病的致病菌是真菌尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC),其能侵染香蕉根部從而引起的維管束病害,導致維管束木質(zhì)化。由于尖孢鐮刀菌是通過土壤傳播,難以防治,對香蕉產(chǎn)業(yè)造成了毀滅性危害。香蕉枯萎病一直是熱帶作物病害的研究熱點,目前已有越來越多的高新技術被應用于香蕉枯萎病防治。人工肽適體(peptide aptamer或pepaptamers)是一種篩選自人工合成的隨機氨基酸文庫,可高特異性、高親和力結合靶標蛋白質(zhì)的短肽,可用于研發(fā)具有潛在應用價值的生物抗菌劑。將人工肽適體應用于香蕉枯萎病防治,是香蕉產(chǎn)業(yè)病害防控研究的新突破。本研究基于高容量肽適體文庫,在作用靶標未知的情況下對尖孢鐮刀菌孢子進行抑菌實驗,篩選出能夠特異性抑制尖孢鐮刀菌,且對香蕉植株無害、環(huán)境友好型的肽適體,并研究其作用機制。主要研究結果如下:(1)通過抑菌實驗初步篩選出對尖孢鐮刀菌有抑制作用的肽適體SNP-D4,測序結果顯示其全長576 bp,編碼191個氨基酸,整體蛋白分子量大小為21 kDa。(2)構建SNP-D4與支架蛋白SN的原...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２肽適體單克�。校茫医Y果??注：Ｍ為Ｍａｒｋｅｒ，１－３２為不同的肽適體單克隆

３．?１．?１?肽適體文庫的轉化與ＰＣＲ驗證??通過文庫質(zhì)粒轉化，從肽適體文庫中分離鑒定得到３２個肽適體單克隆，ＰＣＲ??驗證結果見圖２。如圖所示，３２個肽適體單克隆均能被特異性引物擴增，得到明??亮單一的條帶，其實際片段大小在７５０ｂｐ左右，與預期大小一致，表明轉化文庫??質(zhì)粒....

圖３?ＳＮＰ－Ｄ４抑制ＦＯＣ４孢子萌發(fā)??注：紅色圓圈標記的為未萌發(fā)的孢子，紅色箭頭標記的為萌發(fā)受到抑制的孢子

?３．１．２?抑菌實驗篩選肽適體結果??抑菌實驗結果如圖３，在３２個肽適體單克隆中，發(fā)現(xiàn)５種肽適體對尖孢鐮刀??菌孢子具有抑制作用，其中ＳＮＰ－Ｄ４效果最佳。從圖３中可以看出，在相同處理??時間下，ＰＢＳ?（磷酸鹽緩沖液）處理組與轉入ｐＴＲＧ－ＳＮ載體的ｒｅｐｏｒｔｅｒ菌株的細?....

圖４?ＳＮＰ－Ｄ４的核苷酸與氨基酸序列??注：紅色邊框標記部分為可變肽段?

為了確定具有孢子萌發(fā)抑制活性的ＳＮＰ－Ｄ４的序列信息，提取表達ＳＮＰ－Ｄ４??的質(zhì)粒并測序，得到ＳＮＰ－Ｄ４全長５７６?ｂｐ，編碼１９１個氨基酸，整體蛋白分子量??大小為２１?ｋＤａ?（圖４）。其編碼的可變肽段序列為共１６個氨基酸，序列為ＶＴＦＬ??ＶＮＴＹＰＮＧ?ＶＯＳＲ?Ａ?....

圖９透析后的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白電泳??注：Ｍ?為?Ｍａｒｋｅｒ，?１、２?為?ＳＮ?蛋白，３、４?為?ＳＮＰ－Ｄ４?蛋白

??將純化之后的蛋白進行透析，結果如圖９，成功得到了條帶清晰、幾乎沒有??雜蛋白的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白。??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４??１１６．０??：：：〇??３５．０??２５０?－??、■?？二�。颍模�??１８－４??１?．??圖９透析后的ＳＮ和ＳＮＰ－Ｄ４蛋白電泳??注....

本文編號：4056655