半夏,Pinellia ternata(Thunb.)Breit,天南星科半夏屬多年生草本植物,塊莖可入藥,是我國常用中藥之一,2015年最新藥典記錄其有濕痰寒痰,咳喘痰多,痰飲眩悸,風(fēng)痰眩暈,痰厥頭痛,嘔吐反胃,胸脘痞悶,梅核氣;外治癰腫痰核等功效。半夏凝集素為半夏中提取分離出的一種具有高度專一性凝結(jié)甘露糖的蛋白,常與草酸鈣晶體伴生,或佚散于細胞粘液中。根據(jù)現(xiàn)有報道,半夏凝集素也具有抗腫瘤作用,糖基識別作用,免疫應(yīng)激和免疫刺激作用,等。當(dāng)前半夏凝集素的研究主要集中在四個方面:1,半夏凝集素的結(jié)構(gòu),功能,以及提取和分離純化的方法;2,半夏凝集素的生物反應(yīng)器高效表達與變構(gòu)半夏凝集素的表達;3,半夏凝集素的抗腫瘤研究,包括其抗腫瘤機制,抗腫瘤細胞范圍,抗腫瘤佐劑效應(yīng),抗腫瘤活性等等;4,半夏凝集素的轉(zhuǎn)基因抗蟲研究,抗菌研究,以及半夏凝集素的抗蟲機制和機理。本實驗以組織培養(yǎng)為基礎(chǔ)和實驗體系,研究半夏在非生物脅迫下的生理周期的改變,包括半夏的倒伏,恢復(fù),塊莖的成熟,探討其潛在的抗逆基因和調(diào)控方式;然后分析和克隆了半夏凝集素基因,并參考其保守區(qū)域,設(shè)計了若干個單點突變和雙點突變,估測其凝集糖基的潛...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語
第一章 引言
    1.1 半夏凝集素的凝集性
        1.1.1 半夏簡介
        1.1.2 凝集素發(fā)展史
        1.1.3 半夏凝集素發(fā)展史
    1.2 半夏凝集素的工業(yè)應(yīng)用
        1.2.1 半夏凝集素的生物反應(yīng)表達
        1.2.2 半夏凝集素的農(nóng)業(yè)應(yīng)用
    1.3 半夏凝集素的醫(yī)學(xué)研究進展
        1.3.1 膜電位影響與膜受體
        1.3.2 PTA引起的信號類細胞凋亡
        1.3.3 機體的免疫
        1.3.4 細胞自噬
        1.3.5 醫(yī)學(xué)其他應(yīng)用
    1.4 研究的目的和意義
第二章 半夏的組織培養(yǎng)與熱脅迫后恢復(fù)
    2.1 實驗材料和試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 試劑和儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 母液配置
        2.2.2 材料處理
        2.2.3 半夏的組織培養(yǎng)
        2.2.4 半夏組培苗的乙烯利處理
        2.2.5 半夏組培苗的高溫脅迫處理
        2.2.6 半夏愈傷組織生根培養(yǎng)，苗誘導(dǎo)培養(yǎng)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 3.5 mg/L 6-BA+MS培養(yǎng)基培養(yǎng)半夏無菌苗
        2.3.2 不同激素對半夏愈傷組織誘導(dǎo)
        2.3.3 乙烯利處理半夏實驗結(jié)果
        2.3.4 乙烯利處理半夏組培苗枯萎狀況
        2.3.5 乙烯利處理下半夏塊莖生長大小
        2.3.6 熱脅迫后半夏植株的恢復(fù)
        2.3.7 半夏愈傷組織生根培養(yǎng)
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 PTA結(jié)構(gòu)與分子研究
    3.1 實驗材料與儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
        3.1.4 實驗涉及質(zhì)粒以及質(zhì)粒圖譜
        3.1.5 實驗流程圖
    3.2 實驗方法
        3.2.1 SDS提取DNA
        3.2.2Trizol試液提取RNA
        3.2.3 PCR引物設(shè)計
        3.2.4 M-Mu LV法Reverse PCR
        3.2.5 PCR擴增DNA序列
        3.2.6 割膠回收
        3.2.7 E.coli DH5α 感受態(tài)細胞制作
        3.2.8 TA克隆
        3.2.9 質(zhì)粒提取
        3.2.10 雙酶切實驗
        3.2.11 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        3.2.12 p Cambia1303質(zhì)粒構(gòu)建
        3.2.13 LBA4404農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞制作
        3.2.14 LBA4404農(nóng)桿菌載體構(gòu)建
        3.2.15 PTA點突變序列構(gòu)建
        3.2.16 EGFP-N1載體構(gòu)建
        3.2.17 PTA環(huán)肽結(jié)構(gòu)基因擴增
        3.2.18 PTA的RACE初步探索
        3.2.19 PTA抗性大腸桿菌菌株的紫外誘變
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 PTA序列分析
        3.3.2 Antheprot Graphic viewer分析PTA信號肽位置
        3.3.3 PTA的序列擴增
        3.3.4 PTA測序結(jié)果
        3.3.5 PTA的點突變序列
        3.3.6 酶切實驗結(jié)果
        3.3.7 菌液PCR
        3.3.8 紫外誘變耐PTA篩選
        3.3.9 PTA分子的單酶切產(chǎn)物
        3.3.10 PTA短肽PCR電泳
        3.3.11 PTA短肽TA克隆菌液PCR
    3.4 結(jié)果與討論
第四章 PTA的浮萍生物表達
    4.1 實驗材料與儀器
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗步驟
        4.2.1 浮萍無菌體系
        4.2.2 浮萍祛藻純化培養(yǎng)
        4.2.3 浮萍的無菌培養(yǎng)
        4.2.4 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化實驗
        4.2.5 浮萍中轉(zhuǎn)基因成分的鑒定
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 浮萍的去藻化培養(yǎng)
        4.3.2 浮萍轉(zhuǎn)化培養(yǎng)
        4.3.3 浮萍最終生長狀態(tài)
        4.3.4 轉(zhuǎn)基因浮萍一次篩選后PCR鑒定
        4.3.5 轉(zhuǎn)基因浮萍二次篩選后PCR鑒定
    4.4 結(jié)果與討論
結(jié)論
參考文獻
成果
致謝



本文編號：4044591