WRKY轉(zhuǎn)錄因子是植物響應(yīng)病原菌脅迫最重要的轉(zhuǎn)錄因子之一,且參與抗病反應(yīng)及信號傳導(dǎo)通路的調(diào)控。為研究辣椒WRKY基因的生物學(xué)特征,以辣椒高抗疫病材料CM334為試材,克隆獲得響應(yīng)疫霉菌誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子CaWRKY14。生物信息學(xué)分析表明,該基因DNA全長2 530 bp,cDNA全長1 662 bp,含有5個內(nèi)含子,編碼553個氨基酸,含有1個WRKY保守結(jié)構(gòu)域,屬于GroupⅡ(b)。實(shí)時(shí)熒光定量表達(dá)分析表明,CaWRKY14不僅受ABA和疫霉菌脅迫誘導(dǎo)表達(dá),且表達(dá)量分別在12 h和24 h時(shí)達(dá)到峰值,分別是對照的8.54和8.04倍,同時(shí)也受高鹽、熱激和干旱脅迫誘導(dǎo)。利用VIGS技術(shù)對CaWRKY14轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行沉默后發(fā)現(xiàn),抗病材料CM334接種疫霉菌后趨于發(fā)病。研究表明,CaWRKY14基因在辣椒響應(yīng)疫霉菌脅迫進(jìn)程中可能發(fā)揮著重要作用。

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【部分圖文】：

圖1 辣椒CaWRKY14基因PCR擴(kuò)增

以辣椒高抗疫病材料CM334的cDNA和DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增(圖1),分別在cDNA和DNA中擴(kuò)增出1700bp和2500bp左右目的片段,對目的片段進(jìn)行切膠回收、連接轉(zhuǎn)化和PCR檢查測序。測序結(jié)果顯示,片段與基因組數(shù)據(jù)庫中目的片段大小完全一致,分別為1662bp和2....

圖2 辣椒不同栽培種WRKY14基因編碼氨基酸序列比對

圖1辣椒CaWRKY14基因PCR擴(kuò)增2.2不同栽培種CaWRKY14轉(zhuǎn)錄因子序列差異分析

圖3 WRKY14多序列比對

利用辣椒(Capsicumannuum)栽培種材料CM334的CaWRKY14基因序列對辣椒基因組進(jìn)行Blast比對,獲得在栽培種Capsicumbaccatum和Capsicumchinense中對應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子CbWRKY14和CcWRKY14。CbWRKY14基因cDN....

圖4 辣椒CaWRKY14與GenBank中相似

WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物生物和非生物脅迫應(yīng)答,如圖5所示,疫霉菌、ABA、高溫、干旱和高鹽等逆境脅迫均能誘導(dǎo)CaWRKY14的表達(dá)。本研究中,對高抗疫病辣椒材料接種105spores/mL疫霉菌后,CaWRKY14的表達(dá)呈上調(diào)模式,處理24h時(shí)基因表達(dá)量達(dá)到峰值,比對照提高8....

本文編號：4051629