葡萄作為重要的經(jīng)濟(jì)作物,具有巨大的食用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值,但其產(chǎn)量往往受到致病菌的影響。我國(guó)的葡萄栽培面積較為廣泛,且部分中國(guó)野生葡萄對(duì)病原菌表現(xiàn)出一定的抗性。芪類(lèi)化合物是葡萄中一種次生代謝產(chǎn)物,其中白藜蘆醇為主要的抗菌成分,是植物用來(lái)抵御致病菌侵害的主要防御機(jī)制之一。在芪類(lèi)化合物的合成過(guò)程中,轉(zhuǎn)錄因子MYB14發(fā)揮著不可或缺的作用,它可以激活芪合成酶/白藜蘆醇合成酶,進(jìn)而對(duì)芪類(lèi)化合物的合成起到重要的調(diào)控作用。在本研究中,我們從中國(guó)野生毛葡萄‘平邑’(Vitis quinquangularis-Pingyi,V.quinquangularis-PY)中鑒定了一種轉(zhuǎn)錄因子MYB14,可以通過(guò)過(guò)表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子,來(lái)提高芪合成酶基因(St Sy)的表達(dá)和主要的芪類(lèi)化合物-白藜蘆醇的含量。研究表明,Vq MYB14啟動(dòng)子p Vq MYB14的激活與flg22引發(fā)的病原相關(guān)分子模式觸發(fā)免疫(PTI)以及harpin引發(fā)的效應(yīng)子觸發(fā)免疫(ETI)有關(guān)。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)Vq MYB14和歐洲栽培葡萄佳麗釀Vv MYB14的啟動(dòng)子存在三個(gè)部分的序列差異,特別是p Vq MYB14中的一個(gè)11bp片段,對(duì)PTI和ETI...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 葡萄研究概況
    1.2 植物的免疫
    1.3 參與植物免疫的早期信號(hào)通路
        1.3.1 鈣離子
        1.3.2 活性氧
        1.3.3 MAPK級(jí)聯(lián)途徑
    1.4 芪類(lèi)化合物
        1.4.1 芪類(lèi)化合物在植物抗逆反應(yīng)中的作用
        1.4.2 調(diào)控芪類(lèi)化合物合成的上游信號(hào)分子
    1.5 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控芪類(lèi)化合物的合成
        1.5.1 R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.5.2 轉(zhuǎn)錄因子MYB14對(duì)芪類(lèi)化合物合成的調(diào)控
    1.6 誘導(dǎo)子flg22和harpin
    1.7 研究目的及意義
第二章 載體構(gòu)建和平邑VqMYB14_PY過(guò)表達(dá)分析
    2.1 材料及試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 試劑制備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 提取‘平邑’與佳麗釀的基因組DNA
        2.2.2 克隆‘平邑’與佳麗釀的MYB14
        2.2.3 回收PCR產(chǎn)物
        2.2.4 連接載體T-Vector p MD?19
        2.2.5 轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.6 重組克隆載體的菌液PCR檢測(cè)
        2.2.7 提取重組質(zhì)粒
        2.2.8 ‘平邑’與佳麗釀MYB14啟動(dòng)子區(qū)域的克隆
        2.2.9 MYB14 啟動(dòng)子與GUS融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.10 pVqMYB14和pVvMYB14 突變體的構(gòu)建
        2.2.11 啟動(dòng)子序列分析
        2.2.12 中國(guó)野生毛葡萄‘平邑’VqMYB14過(guò)表達(dá)分析
        2.2.13 平邑VqMYB14_PY系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子序列分析及平邑MYB14 的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系
        2.3.2 VqMYB14的過(guò)表達(dá)增強(qiáng)了芪合成酶基因的表達(dá)和芪類(lèi)化合物的積累
        2.3.3 平邑和佳麗釀MYB14啟動(dòng)子克隆及序列分析
        2.3.4 平邑和佳麗釀MYB14 啟動(dòng)子與GUS融合表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.4 小結(jié)
第三章 啟動(dòng)子活性
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑配制
        3.1.3 器材
    3.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.2.1 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化煙草葉片
        3.2.2 Flg22和harpin處理轉(zhuǎn)基因煙草葉片
        3.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)啟動(dòng)子活性
            3.2.3.1 RNA的提取
            3.2.3.2 cDNA的合成
            3.2.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)啟動(dòng)子活性
        3.2.4 GUS組織化學(xué)染色
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 經(jīng)flg22和harpin誘導(dǎo)后,pVqMYB14 的活性強(qiáng)于p Vv MYB14
        3.3.2 pVqMYB14和pVvMYB14 活性的差異是和其啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)的差異相關(guān)的
    3.4 小結(jié)
第四章 早期信號(hào)的探索
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.2 植物材料及處理方法
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 測(cè)定‘平邑’葡萄葉片中的H₂O₂含量
        4.2.2 芪類(lèi)化合物的提取
        4.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 Flg22和harpin誘導(dǎo)下pVqMYB14 的上游信號(hào)事件
        4.3.2 Flg22 誘導(dǎo)下VqMYB14 的激活更依賴于Ca2+信號(hào)
        4.3.3 Harpin誘導(dǎo)下VqMYB14 的激活更依賴于ROS
        4.3.4 Harpin誘導(dǎo)下的活性氧爆發(fā)早于flg22
    4.4 討論
        4.4.1 鈣離子內(nèi)流
        4.4.2 活性氧爆發(fā)
        4.4.3 MAPK信號(hào)
        4.4.4 芪類(lèi)化合物的產(chǎn)生
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：4052328