黃瓜(Cucumis sativus L.)是屬于葫蘆科的重要瓜果類蔬菜,對(duì)于保障我國(guó)蔬菜正常安全供應(yīng)中具有重要作用。錳是植物必需的微量元素,土壤中錳缺乏或錳過量都將抑制植物生長(zhǎng)發(fā)育。黃瓜設(shè)施栽培中,由于土壤酸化、含錳化肥和農(nóng)藥過度使用,使得土壤錳含量過高,黃瓜易發(fā)生錳毒害,表現(xiàn)出褐脈葉、生長(zhǎng)停滯、產(chǎn)量降低�；�于此,開展黃瓜錳轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究,對(duì)于解決黃瓜的錳毒害,提高設(shè)施園藝的利用效率,進(jìn)行黃瓜優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)生產(chǎn)具有重要的實(shí)際意義。植物錳轉(zhuǎn)運(yùn)與許多轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員相關(guān),其中MTPs家族許多成員被報(bào)道與錳密切相關(guān)。本課題以黃瓜MTP家族為研究對(duì)象,重點(diǎn)研究Fe/Zn-MTP亞家族成員的Cs MTP6,主要獲得如下研究結(jié)果:基因注釋顯示黃瓜共有9個(gè)MTP家族成員,Mn-MTP、Fe/Zn-MTP和Zn-MTP亞家族各具有3個(gè)成員。其中,Csa7G395210可專一性受錳脅迫誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá),與鋅、鐵、銅脅迫處理無關(guān)。依據(jù)與At MTP6相似性,將Csa7G395210命名為Cs MTP6。Cs MTP6含12個(gè)外顯子,編碼區(qū)全長(zhǎng)1503 bp,編碼500個(gè)氨基酸。蛋白結(jié)構(gòu)域分析顯示Cs MTP6含有1個(gè)...

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 錳對(duì)植物的生理作用
        1.1.1 錳作為植物必需微量元素及其重要性
        1.1.2 植物的錳毒害
    1.2 植物錳吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、解毒的作用機(jī)制
        1.2.1 植物錳吸收轉(zhuǎn)運(yùn)過程和相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
        1.2.2 水稻錳吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)研究進(jìn)展
        1.2.3 其它植物錳吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)研究進(jìn)展
    1.3 植物MTP轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及其調(diào)控植物錳脅迫的研究進(jìn)展
    1.4 研究目的和意義
    1.5 研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線
        1.5.1 研究?jī)?nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
2 黃瓜MTPs基因注釋及CsMTP6基因分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.1 基因注釋
        2.1.2 基因信息分析
        2.1.3 基因表達(dá)分析
            2.1.3.1 材料種植、收集
            2.1.3.2 總RNA提取
            2.1.3.3 逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA
            2.1.3.4 熒光定量PCR檢測(cè)
        2.1.4 黃瓜金屬離子脅迫處理分析
        2.1.5 蛋白亞細(xì)胞定位分析
            2.1.5.1 CsMTP6基因克隆
            2.1.5.2 CsMTP6蛋白亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建
            2.1.5.3 亞細(xì)胞定位
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 黃瓜CsMTPs基因注釋、分類
        2.2.2 CsMTP6基因信息分析
        2.2.3 CsMTP6基因的組織表達(dá)檢測(cè)
        2.2.4 不同金屬離子脅迫下CsMTP6表達(dá)分析
        2.2.5 CsMTP6蛋白的亞細(xì)胞定位
3 CsMTP6調(diào)控錳脅迫耐受的功能分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.1 CsMTP6轉(zhuǎn)化酵母及金屬脅迫處理
            3.1.1.1 基因克隆
            3.1.1.2 酵母轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
            3.1.1.3 釀酒酵母轉(zhuǎn)化
            3.1.1.4 酵母表型觀察
            3.1.1.5 酵母細(xì)胞的錳含量檢測(cè)
        3.1.2 CsMTP6遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥及金屬脅迫處理
            3.1.2.1 基因克隆
            3.1.2.2 擬南芥轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
            3.1.2.3 載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
            3.1.2.4 擬南芥侵染轉(zhuǎn)化
            3.1.2.5 擬南芥陽性轉(zhuǎn)化子的篩選
            3.1.2.6 擬南芥錳脅迫處理及表型觀察
            3.1.2.7 擬南芥中錳含量檢測(cè)
        3.1.3 黃瓜錳金屬離子脅迫處理分析
            3.1.3.1 黃瓜錳金屬離子脅迫處理方法
            3.1.3.2 錳脅迫下黃瓜CsMTP6表達(dá)檢測(cè)
            3.1.3.3 黃瓜中錳含量檢測(cè)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 CsMTP6轉(zhuǎn)化酵母的功能分析
            3.2.1.1 CsMTP6酵母表達(dá)載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)化
            3.2.1.2 酵母CsMTP6轉(zhuǎn)化子的金屬離子脅迫耐受分析
        3.2.2 CsMTP6轉(zhuǎn)化擬南芥的功能分析
            3.2.2.1 CsMTP6過表達(dá)擬南芥的轉(zhuǎn)化和篩選
            3.2.2.2 CsMTP6過表達(dá)擬南芥的錳處理分析
        3.2.3 黃瓜不同品種中CsMTP6表達(dá)水平與錳積累量分析
4 小結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄 A 實(shí)驗(yàn)主要試劑
    附錄 B 實(shí)驗(yàn)主要溶液配方
    附錄 C 實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備
個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：4054710