隨著全球森林資源貿易量的急劇增加,木材尤其是熱帶木材物種已迅速成為《瀕危野生動植物種國際貿易公約》(CITES)近年來關注的焦點。開展木材識別技術研究,實現(xiàn)其科學與準確識別,是保護瀕危木材資源的關鍵技術基礎。僅依靠傳統(tǒng)木材解剖技術,一般只能識別木材到“屬”或“類”,無法實現(xiàn)“種”的識別。最新發(fā)展的木材DNA條形碼識別技術為解決這一科學難題提供了可能。盡管植物DNA提取與分析技術已日趨成熟,但對于經(jīng)過干燥加工或長期存儲的木材,則很難獲得高質量的DNA。本論文針對干燥處理或長期存儲的木材組織,通過突破DNA高效提取技術瓶頸,并優(yōu)選確定DNA條形碼,以實現(xiàn)瀕危木材“種”的識別。本研究通過優(yōu)化溫浴時間、木粉量與DNA裂解液體積比、裂解液化學成分等技術參數(shù),改進了木材DNA提取技術;并定量比較改進的CTAB法與改進的Qiagen試劑盒法,優(yōu)選了木材DNA提取方案,初步建立了木材DNA提取技術體系。利用聚合酶鏈式反應(PCR),對多條短DNA片段進行擴增;通過BLAST序列比對及構建系統(tǒng)進化樹,優(yōu)選確定了適用于木材識別的DNA條形碼類型及片段長度,并分析了干燥處理及存儲時間等因素對木材DNA的影響。...

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
        1.1.1 研究背景
        1.1.2 國內外研究現(xiàn)狀及評述
    1.2 研究目標和主要研究內容
        1.2.1 關鍵的科學問題與研究目標
        1.2.2 主要研究內容
    1.3 研究技術路線
第二章 木材DNA提取方法建立
    2.1 材料和方法
        2.1.1 樣品制備
        2.1.2 DNA提取
        2.1.3 DNA定量檢測
        2.1.4 PCR擴增
        2.1.5 組織化學分析
        2.1.6 數(shù)理統(tǒng)計
    2.2 結果與討論
        2.2.1 木材DNA提取方法優(yōu)化
        2.2.2 木材DNA提取
        2.2.3 PCR擴增
        2.2.4 改進CTAB法與改進Qiagen試劑盒法比較
        2.2.5 木材組織細胞核和造粉體分布
    2.3 小結
第三章 干燥處理木材的DNA條形碼識別
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 光學顯微分析
        3.1.3 木粉制備
        3.1.4 DNA提取
        3.1.5 DNA定量數(shù)理統(tǒng)計
        3.1.6 引物設計
        3.1.7 PCR擴增
        3.1.8 PCR產(chǎn)物的純化、克隆、測序
        3.1.9 序列比對及系統(tǒng)進化樹構建
    3.2 結果與討論
        3.2.1 白木香屬木材構造特征
        3.2.2 DNA提取與PCR擴增
        3.2.3 序列比對與系統(tǒng)進化分析
        3.2.4 DNA條形碼的篩選與評價
    3.3 小結
第四章 長期存儲木材的DNA條形碼識別
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗方法
    4.2 結果與討論
        4.2.1 胡楊木材構造特征
        4.2.2 長期存儲及考古胡楊木材DNA定量分析
        4.2.3 PCR擴增
        4.2.4 序列比對
        4.2.5 系統(tǒng)進化樹構建
    4.3 小結
第五章 瀕危黃檀屬木材的DNA條形碼識別
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗方法
    5.2 結果與討論
        5.2.1 黃檀屬木材構造特征
        5.2.2 DNA提取與PCR擴增
        5.2.3 序列比對與系統(tǒng)進化分析
        5.2.4 DNA條形碼的篩選與評價
    5.3 小結
第六章 結論與討論
    6.1 結論
        6.1.1 構建木材DNA提取技術體系
        6.1.2 干燥處理對木材DNA的影響
        6.1.3 存儲時間對木材DNA的影響
        6.1.4 優(yōu)選適用于木材識別的DNA條形碼
        6.1.5 基于系統(tǒng)進化樹實現(xiàn)瀕危木材“種”的準確識別
    6.2 創(chuàng)新點
    6.3 展望與建議
參考文獻
在讀期間的學術研究
致謝



本文編號：4044499