為了從菌株ASR-12發(fā)酵液中分離純化獲得抗菌蛋白。將菌株ASR-12發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨沉淀、透析除鹽后獲得粗蛋白,粗蛋白進(jìn)行熱處理和Q Sepharose Fast Flow柱層析,純化后的蛋白進(jìn)一步進(jìn)行LC-MS鑒定,并克隆其編碼基因進(jìn)行測(cè)序。粗蛋白經(jīng)熱處理和柱層析后得到5個(gè)吸收峰,活性檢測(cè)結(jié)果顯示峰Ⅳ具有較高抑菌活性,經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)顯示為單一條帶,分子量約為50k Da。LC-MS鑒定結(jié)果顯示抗菌蛋白與M42家族肽酶同源性最高,覆蓋度達(dá)到80%;并能從菌株ASR-12基因組中克隆到M42家族肽酶編碼基因,測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST比對(duì)與解淀粉芽孢桿菌B9601-Y2的M42家族肽酶編碼基因同源性達(dá)100%。菌株ASR-12產(chǎn)生的抗菌蛋白中,M42家族肽酶為主要活性成分。

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【部分圖文】：

圖1 粗蛋白對(duì)軟腐病原菌的抑制作用

生防菌ASR-12的發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨沉淀、溶解、透析除鹽、過濾后，蛋白粗提液呈黃褐色透明狀。蛋白粗提液活性檢測(cè)結(jié)果表明（圖1）：解淀粉芽孢桿菌ASR-12抗菌蛋白粗提液對(duì)大白菜軟腐病原菌具有較強(qiáng)的抑制作用，抑菌圈直徑為23mm。2.2抗菌蛋白的純化及活性檢測(cè)

圖2 粗蛋白熱處理后抑菌活性檢測(cè)

對(duì)蛋白粗提液100℃水浴處理20min后，其上清經(jīng)活性檢測(cè)對(duì)靶標(biāo)病原菌仍有抑制作用，抑菌圈直徑為20mm，略低于對(duì)照的23mm（圖2）。將熱處理后的粗蛋白上清液上強(qiáng)陰離子交換QSapheroseFastFlow柱，在280nm波長處檢測(cè)，共得到5個(gè)主要吸收峰（圖3）....

圖3 抗菌粗蛋白熱處理后的Q Sepharose Fast Flow柱層析圖譜

圖2粗蛋白熱處理后抑菌活性檢測(cè)圖4各吸收峰組分抑菌活性檢測(cè)

圖4 各吸收峰組分抑菌活性檢測(cè)

圖3抗菌粗蛋白熱處理后的QSepharoseFastFlow柱層析圖譜2.3活性峰SDS-PAGE檢測(cè)

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