肉桂酰輔酶A還原酶(cinnamoyl-CoA reductase, CCR)在木質素生物合成途徑中起著關鍵作用。本研究依據轉錄組數據設計特異性引物,采用RT-PCR方法從竹葉花椒(Zanthoxylum armatum)中克隆得到一個全新的CCR基因的全長c DNA序列,命名為ZaCCR。序列分析結果表明,ZaCCR包含完整的cDNA開放閱讀框(OFR),由990 bp組成,編碼329個氨基酸。Blast比對結果顯示該蛋白質屬于CCR家族蛋白;系統進化樹結果顯示竹葉花椒(Zanthoxylum armatum)與蕓香科植物甜橙(Sweet orange, Citrus sinensis)、蜜柑(Satsuma mandarin, Citrus unshiu)等親緣關系較近。熒光定量PCR檢測顯示,ZaCCR在竹葉花椒中的表達量從大到小分別為:嫁接樹的莖、實生樹的莖、嫁接樹的葉、實生樹的葉。

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圖2 竹葉花椒Za CCR蛋白與其他植物CCR蛋白的系統進化樹

研究顯示CCR在木質素的生物合成途徑中起著不可或缺的作用，認為其可能調控木質素生物合成途徑中碳的流向(李波等,2006)。本研究從轉錄組角度設計CCR基因的特異性引物，通過基因測序成功驗證了所克隆基因為竹葉花椒CCR基因，該基因全長990bp，編碼329個氨基酸。蛋白序列分析發(fā)....

圖1 CCR蛋白序列比對

將推導出來的ZaCCR蛋白序列在美國國家生物技術信息中心(NCBI)進行比對，得到其他植物CCR蛋白序列，用MEGA7中自帶的ClusterW進行蛋白序列多重比對后，用Neighbor-joining算法(自檢舉1000次)繪制出竹葉花椒ZaCCR蛋白與其他植物的CCR....

圖3 Za CCR分別在嫁接樹和實生樹的莖和葉中的表達情況

通過對竹葉花椒ZaCCR蛋白進行系統進化分析，發(fā)現該蛋白與蕓香科的甜橙(Citrussinensis)、蜜柑(Citrusunshiu)、克里曼丁桔(Citrusclementina)CCR蛋白同源性較高，再次驗證了本試驗所克隆基因為CCR基因�；ń肥侵袊耘鄽v史悠久的....

本文編號：4043674