目的:建立基于單克隆抗體的檢測番茄等植物中鳳果花葉病毒(Pep MV)的血清學(xué)方法,為Pep MV的田間調(diào)查和診斷及其科學(xué)防控提供快速實(shí)用的檢測技術(shù)。創(chuàng)新點(diǎn):首次制備了抗Pep MV的高度特異和靈敏的單克隆抗體,并利用制備的單抗建立了3種能特異且靈敏地檢測Pep MV的血清學(xué)方法。方法:以差速離心方法提純的Pep MV粒子作為免疫原免疫BALB/c小鼠,通過雜交瘤技術(shù)獲得了能穩(wěn)定傳代并分泌Pep MV單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株;雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔獲得單克隆抗體腹水,并以制備單抗為核心,根據(jù)血清學(xué)原理建立檢測植物中Pep MV的雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(DAS-ELISA)、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Dot-ELISA)和組織印跡酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Tissue print-ELISA)三種血清學(xué)檢測方法;利用田間番茄樣品分析建立的血清學(xué)方法檢測Pep MV的有效性。結(jié)論:利用雜交瘤技術(shù)獲得了6株能分泌高度特異靈敏Pep MV單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,以分泌的單抗為核心建立了檢測植株中Pep MV的DASELISA、Dot-ELISA和Tissue print-ELISA三種高度靈敏的血清...

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【文章目錄】：
1 Introduction
2 Materials and methods
    2.1 Virus sources and plant samples
    2.2 Generation of murine m Abs
    2.3 ACP-ELISA
    2.4 DAS-ELISA
    2.5 Dot-ELISA and Tissue print-ELISA
    2.6 RT-PCR and sequence analysis
3 Results
    3.1 Virus purification
    3.2 Generation and characterization of anti-Pep MV m Abs
    3.3 DAS-ELISA for Pep MV detection
    3.4 Dot-ELISA and Tissue print-ELISA for Pep MV detection
    3.5 Detection of Pep MV infection in the field-collected tomato samples
4 Discussion
Contributors
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