目的本文旨在研究E3連接酶UHRF2與p21之間的相互作用關系,探索UHRF2在修復HEK293細胞中由羥基脲(HU)引起的DNA損傷的機制。方法本文通過Western blotting檢測過表達UHRF2對于p21表達量的調(diào)節(jié)作用;免疫熒光染色(IF)驗證UHRF2與p21的亞細胞定位關系;免疫共沉淀(Co-IP)驗證UHRF2與p21的相互結合關系以及探索其主要的結合結構域;半衰期(Half-life)實驗檢測UHRF2對p21半衰期的調(diào)節(jié)作用;體內(nèi)泛素化實驗檢測UHRF2對p21的泛素化作用;Western blotting與免疫熒光染色相結合,探索UHRF2如何作用于p21來修復羥基脲引起的DNA損傷。結果Western blotting顯示,在HEK293、Hela、LO2、HepG2細胞中過表達UHRF2后,HEK293、Hela細胞中p21的表達量明顯降低,而LO2、HepG2細胞中p21的表達量未見有明顯差異;IF與Co-IP證實,在HEK293、Hela細胞中,UHRF2與p21相互結合,且UHRF2的RING結構域為主要的結合結構域;Half-life實驗證明,在H...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1不同細胞中過表達UHRF2對p21表達量的調(diào)控作用Fig1RegulatoryeffectoftheoverexpressionofUHRF2ontheexpressionofp21in

圖1不同細胞中過表達UHRF2對p21表達量的調(diào)控作用ulatoryeffectoftheoverexpressionofUHRF2ontheexpressidifferentcellsp21的亞細胞共定位、Hela細胞中UHRF2抑制....

圖2UHRF2與p21的亞細胞共定位Fig2Subcellularco-localizationofUHRF2andp21

圖2UHRF2與p21的亞細胞共定位Fig2Subcellularco-localizationofUHRF2andp21RF2與p21相互結合UHRF2與p21的亞細胞共定位的情況，我們需要了解UHRF2與p互結合。在HEK293、....

圖3UHRF2與p21相互結合

圖3UHRF2與p21相互結合Fig3UHRF2interactswithp212.4UHRF2與p21結合的主要結合結構域的測定UHRF2具有多個結構域，我們已經(jīng)證實UHRF2與p21相互結合，在此我們將探察UHRF2與p21相互結....

圖4UHRF2與p21的結合結構域測定Fig4ThebindingdomaindetectionofUHRF2andp21

圖4UHRF2與p21的結合結構域測定Fig4ThebindingdomaindetectionofUHRF2andp212調(diào)控p21的半衰期2可以抑制p21的表達已經(jīng)得到證實，這里我們繼續(xù)研究UHR蛋白的半衰期產(chǎn)生影響。將pCMV-....

本文編號：4003488