目的:衰老是由多種因素造成的一種生物現(xiàn)象,其特點(diǎn)是炎癥反應(yīng)增加,機(jī)體整體適應(yīng)能力下降。衰老與多種器官系統(tǒng)性生理衰退有關(guān),其中包括心血管系統(tǒng)。老年人群中,衰老相關(guān)的心血管疾病的發(fā)病率大幅度上升。在衰老過程中活性氧含量增加,因此本實(shí)驗(yàn)的目的就是通過在體外用H2O2處理心肌細(xì)胞,模擬體內(nèi)氧化應(yīng)激環(huán)境,并利用衰老鼠模型研究炎癥在衰老中的作用,同時(shí)探究間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體(UMSC-Exo)通過Lnc RNA MALAT1對(duì)炎癥和衰老的調(diào)控作用。我們的研究將通過抑制炎癥反應(yīng)為減緩衰老以及治療衰老相關(guān)的心臟疾病提供一種新的治療策略。方法:我們選用大鼠心肌細(xì)胞系(H9C2)和衰老鼠作為研究對(duì)象。1、心肌細(xì)胞經(jīng)H2O2處理后,通過檢測(cè)炎癥因子TNF-α,衰老基因p21的表達(dá)變化,以及通過β-半乳糖苷酶染色,研究氧化應(yīng)激對(duì)心肌細(xì)胞中炎癥反應(yīng)和細(xì)胞衰老的影響;2、通過檢測(cè)NF-κB的活性及其亞蛋白p-p65的表達(dá)變化,研究氧化應(yīng)激,IKKβ的特異性抑制劑IMD-0354,si IKKβ以及UMSC-Exo對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響;3、對(duì)H9C2細(xì)胞進(jìn)行H2O2處理前,用IMD-0354或UMSC-Ex...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
第二章 材料與方法
    1 材料
        1.1 細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要抗體
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和傳代
        2.2 細(xì)胞處理
        2.3 流式細(xì)胞術(shù)
        2.4 WesternBlot
        2.5 qRT-PCR
        2.6 細(xì)胞核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)
        2.7 NF-κB啟動(dòng)子-熒光素酶實(shí)驗(yàn)
        2.8 siRNA的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        2.9 ELISA實(shí)驗(yàn)
        2.10 PKH26標(biāo)記UMSC-Exo實(shí)驗(yàn)
        2.11 β-半乳糖苷酶染色實(shí)驗(yàn)
        2.12 成像流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)
        2.13 MALAT1結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.14 p65蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.15 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.16 數(shù)據(jù)分析
第三章 結(jié)果
    1 建立心肌細(xì)胞衰老模型
        1.1 心肌細(xì)胞衰老模型的建立
        1.2 衰老對(duì)炎癥反應(yīng)的影響
        1.3 衰老對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        1.4 衰老對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響
        1.5 衰老對(duì)總p65和p-p65s536核轉(zhuǎn)移的影響
    2 IMD-0354對(duì)心肌細(xì)胞衰老的影響
        2.1 IMD-0354對(duì)心肌細(xì)胞炎癥和凋亡的影響
        2.2 IMD-0354對(duì)心肌細(xì)胞衰老的影響
    3 siIKKβ對(duì)心肌細(xì)胞衰老的影響
        3.1 siIKKβ對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響
        3.2 siIKKβ對(duì)心肌細(xì)胞炎癥和凋亡的影響
        3.3 siIKKβ對(duì)心肌細(xì)胞衰老的影響
    4 UMSC-Exo對(duì)心肌細(xì)胞衰老的影響
        4.1 UMSC-Exo對(duì)心肌細(xì)胞衰老和炎癥的影響
        4.2 UMSC-Exo對(duì)心肌細(xì)胞凋亡和增殖的影響
    5 UMSC-Exo對(duì)心臟衰老的影響
        5.1 檢測(cè)衰老過程中p21和TNF-α的表達(dá)
        5.2 尾靜脈注射的UMSC-Exo在體內(nèi)的駐留情況
        5.3 UMSC-Exo對(duì)心臟衰老的影響
        5.4 UMSC-Exo對(duì)心臟中炎癥的影響
    6 UMSC-Exo中LncRNAMALAT1對(duì)細(xì)胞衰老的影響
        6.1 MALAT1在UMSC及UMSC-Exo中的表達(dá)
        6.2 MALAT1在UMSC中的亞細(xì)胞定位
        6.3 MALAT1在心肌細(xì)胞中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位
        6.4 檢測(cè)MALAT1的沉默效率
        6.5 MALAT1對(duì)細(xì)胞衰老過程中炎癥的影響
        6.6 MALAT1對(duì)心肌細(xì)胞衰老的影響
        6.7 MALAT1對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響
    7 UMSC-Exo中LncRNAMALAT1對(duì)心臟衰老的影響
        7.1 檢測(cè)衰老過程中MALAT1的表達(dá)
        7.2 MALAT1對(duì)心臟衰老和炎癥的影響
        7.3 MALAT1對(duì)心臟功能的影響
    8 MALAT1調(diào)控炎癥反應(yīng)的機(jī)制圖
第四章 討論
第五章 結(jié)論
    1 結(jié)論
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
    3 后續(xù)研究展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文
文中主要縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：4040672