SWI/SNF是一種在進(jìn)化上保守的ATP依賴的多亞基染色質(zhì)重塑復(fù)合物,其核心亞單位BRG1或BRM具有ATP酶活性,它們利用水解ATP釋放的能量來改變?nèi)旧�體的結(jié)構(gòu),從而改變轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子對核小體DNA的可接近性,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對基因表達(dá)的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)SWI/SNF在細(xì)胞的多個生理過程中具有重要作用,如轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、細(xì)胞周期等。目前在胚胎干細(xì)胞中有關(guān)SWI/SNF復(fù)合物的相關(guān)報(bào)道,多數(shù)是在鼠的胚胎干細(xì)胞(Mouse embryonic stem cell,MES)中的研究,尚無在人胚胎干細(xì)胞(Human embryonic stem cell,HES)中的報(bào)道。我們利用蛋白質(zhì)免疫印跡、快速液相層析、蛋白質(zhì)免疫共沉淀和質(zhì)譜分析等實(shí)驗(yàn)技術(shù)對SWI/SNF染色質(zhì)重塑復(fù)合物在HES中的組成及其分子伴侶進(jìn)行了探究。快速液相層析實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,BRG1、BAF155和BAF170存在同一復(fù)合物中,蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),BRG1可以共沉淀BAF155、BAF170,同時,BAF155、BAF170也可以共沉淀BRG1,說明在HES中BRG1,BAF155、BAF170相互作用。另外,我們發(fā)現(xiàn)SWI/SNF組分在...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    第一節(jié) 染色質(zhì)重塑復(fù)合物
    第二節(jié) 胚胎干細(xì)胞與SWI/SNF復(fù)合物
    第三節(jié) SWI/SNF復(fù)合物功能機(jī)制研究
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料
        1. 實(shí)驗(yàn)試劑
        2. 實(shí)驗(yàn)儀器
        3. 質(zhì)粒
        4. 細(xì)胞株
        5. 細(xì)胞培養(yǎng)
        6. 抗體
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法
        1. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)
        2. 分子克隆(molecular cloning)
        3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的構(gòu)建
        4. 快速蛋白液相色譜(Fastprotein liquid chromatography,FPLC)
        5. 免疫共沉淀(coimmunoprecipitation,COIP)技術(shù)
        6. 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blotting,WB)技術(shù)
        7. 銀染(silver staining)技術(shù)
        8. 質(zhì)譜分析(mass spectrometry analysis)技術(shù)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    第一節(jié) SWI/SNF復(fù)合物在HES中的組成分析
    第二節(jié) 質(zhì)譜分析SWI/SNF在HES中的組成及其作用伴侶
第四章 總結(jié)與討論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4051351