結(jié)核分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis）是結(jié)核病的主要致病菌。找到結(jié)核分支桿菌的特異性抗原對于發(fā)展準確有效的診斷方法具有重要作用。結(jié)核分支桿菌TB4抗原是特指分子量集中于32KD⁴0KD、及28KD、23KD²5KD的多肽抗原組。它是與結(jié)核病特異性診斷相關的成份，對結(jié)核病診斷的敏感性為0.9012，特異性為0.9639�？梢�，這一成份在結(jié)核病診斷中具有一定的應用價值。按照傳統(tǒng)的方法，TB4抗原的制備，要從結(jié)核分支桿菌H37Rv菌株中提取，既費時又費事，對人體造成致病威脅。而采用基因工程技術制備TB4抗原則克服了上述困難。 本研究從滅活的人型結(jié)核分支桿菌H37Rv菌株中提取細菌總DNA，根據(jù)TB4兩種抗原成份：TB32Ag和MPT64Ag的基因合成引物（P1，P2），以總DNA為模板，用特異性引物（P1，P2）進行聚合酶鏈式反應（PCR），擴增出TB32Ag，MPT64Ag基因， 并進行核苷酸序列分析。結(jié)果表明：所克隆的TB32Ag由568 bp組成，編碼189個氨基酸； MPT64Ag由644 bp...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
一、 摘要
    Abstract
二、 緒論
    2.1 抗原成份研究進展
    2.2 結(jié)核分支桿菌TB4抗原
    2.3 TB32Ag與MPT64Ag抗原成份
    2.4 基因工程技術與結(jié)核抗原成份研究
    2.5 結(jié)核病的診斷現(xiàn)狀
三、 實驗材料
    3.1 菌種與質(zhì)粒
    3.2 各種培養(yǎng)基
    3.3 主要生化試劑
    3.4 基因工程酶類
    3.5 標準分子量Marker
    3.6 各種主要緩沖液
    3.7 主要儀器
四、 實驗方法
    4.1 結(jié)核分支桿菌H37Rv菌株DNA的制備與純化
    4.2 質(zhì)粒DNA的制備
    4.3 PCR擴增制備目的基因
    4.4 PCR產(chǎn)物的克隆
    4.5 目的基因的初步表達
    4.6 目的基因表達產(chǎn)物的免疫學鑒定
五、 結(jié)果
    5.1 質(zhì)粒DNA圖譜
    5.2 TB32AgMPT64Ag基因的克隆與篩選
    5.3 重組質(zhì)粒的誘導表達及其表達產(chǎn)物的SDS-PAGE鑒定
    5. 4 重組表達產(chǎn)物的免疫學鑒定
    5.5 低分子量蛋白質(zhì)標準曲線
六、 討論
    6.1 結(jié)核分支桿菌DNA提取方法探討
    6.2 各種Tag聚合酶性能探討
    6.3 原核系統(tǒng)表達探討
    6.4 重組菌蛋白表達的免疫學鑒定
    6.5 理論與實際意義
七、 全文小結(jié)
八、 參考文獻
九、 致謝



本文編號：4050455