MAE是本實驗室設(shè)計、化學(xué)合成的具有理想抗菌活性的融合抗菌肽，來源 于蛙皮素的N端和蜂毒素的N端，中間加上鉸鏈區(qū)AGP（Ala-Gly-Pro），已根 據(jù)其氨基酸殘基序列設(shè)計了mae基因（全長81bp），并已克隆到pTYB2，并 在大腸桿菌ER2566中表達。但該系統(tǒng)表達的目的蛋白MAE分子量太小，量 也少，難以檢測到。 本文把mae基因從pTYB2-mae亞克隆到pMYB5，即設(shè)計上下游引物， 雙酶切PCR產(chǎn)物和載體pMYB5進行定向克隆，經(jīng)過鑒定、測序，證實已克 隆成功。大腸桿菌ER2566（pMYB5-MAE）誘導(dǎo)表達的產(chǎn)物過幾丁質(zhì)親和 層析柱，純化得到融合表達的MBP-MAE，其分子量較大，即使有少量表達 也比較容易檢測。同時，在MAE的N端有麥芽糖結(jié)合蛋白，在C端有內(nèi)蛋 白子，使之表達穩(wěn)定。MBP-MAE通過CNBr切割，可將MAE切下來，根據(jù) MAE的陽離子多肽的特性，通過...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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第一部分 前言
    一、 抗菌肽的概念和分類
        一） 抗菌肽、抗生素和抗真菌小肽的區(qū)別
        二） 抗菌肽的分類
    二、 抗菌肽的活性
        一） 抗菌肽抗菌活性及其作用機制
        二） 抗菌肽抑癌活性及其作用機制
    三、 抗菌肽蛋白質(zhì)工程
    四、 組織培養(yǎng)藥物測試
    五、 論文背景與構(gòu)思及技術(shù)路線
第二部分 MA-E基因的亞克隆、表達和純化
    一、 MA-E基因的亞克隆
        一） 實驗材料
        二） 實驗方法
        三） 實驗結(jié)果
    二、 MA-E基因的表達和純化
        一） 實驗材料
        二） 實驗方法
        三） 實驗結(jié)果
第三部分 MA-E生物活性檢測
    一、 抗菌活性檢測
        一） 實驗材料
        二） 實驗方法
        三） 實驗結(jié)果
    二、 抑癌活性檢測
        一） 實驗材料
        二） 實驗方法
        三） 實驗結(jié)果
        小結(jié)
第四部分 討論
參考文獻
附錄一： 各種試劑的配制方法
附錄二： 測序圖譜
致謝



本文編號：4053398