目的:本研究以北京基因型結(jié)核分枝桿菌臨床株的脂阿拉伯甘露聚糖(BJLAM)為研究對象,通過BJ-LAM與人外周血單個核細(xì)胞體外共培養(yǎng),然后檢測上清液中的細(xì)胞因子。探討B(tài)J-LAM對T淋巴細(xì)胞分化的調(diào)控作用,也為BJ-LAM的進一步應(yīng)用提供可靠的理論參考。方法:菌株篩選:于2018年6月20日從武漢市醫(yī)療救治中心一例臨床結(jié)核患者的痰標(biāo)本中,篩選到了一株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株(WH322636),用分枝桿菌特異性引物ITS和RD105區(qū)域缺失法進行基因鑒定。LAM的提取、純化:用Triton X-114提取臨床分離株WH322636、恥垢分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌H37Ra的粗提物,用葡聚糖凝膠柱對粗提物進行純化;得到的LAM通過聚丙烯酰氨凝膠電泳聯(lián)合硝酸銀染色進行顯色,初步判斷四種LAM結(jié)構(gòu)的大小。北京型結(jié)核分枝桿菌LAM對T淋巴細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用:從武漢市醫(yī)療救治中心篩選出30例肺結(jié)核患者(其中菌陰結(jié)核患者19人),12例健康人作對照。抽取受檢者靜脈血2ml,提取PBMC,用純化的LAM(BCG-LAM、BJ-LAM)刺激42個受試者的PBMC細(xì)胞,培養(yǎng)48h后檢測PBMC...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 結(jié)核分枝桿菌入侵機體機制
    1.3 抗結(jié)核細(xì)胞免疫
        1.3.1 抗原呈遞細(xì)胞
        1.3.2 CD4⁺T淋巴細(xì)胞
    1.4 結(jié)核病免疫相關(guān)細(xì)胞因子
        1.4.1 IFN-γ
        1.4.2 白介素10
        1.4.3 白介素17
    1.5 結(jié)核病診斷技術(shù)的進展
    1.6 結(jié)核分枝桿菌相關(guān)糖脂研究現(xiàn)狀
    1.7 北京家族結(jié)核菌株研究現(xiàn)狀
    1.8 研究目的及意義
2 脂阿拉伯甘露聚糖的分離和純化
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 試劑和材料
        2.2.1 主要儀器和設(shè)備
        2.2.3 溶液的配制
        2.2.4 菌株來源
    2.3 實驗方法
        2.3.1 菌種培養(yǎng)及鑒定
        2.3.2 菌種基因型鑒定
        2.3.3 脂聚糖的提取及純化
        2.3.4 結(jié)核分枝桿菌胞壁粗糖純化
        2.3.5 結(jié)核分枝桿菌胞壁脂阿拉伯甘露聚糖SDS-PAGE凝膠電泳
        2.3.6 脂阿拉伯甘露聚糖的鑒定
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 菌種培養(yǎng)
        2.4.2 菌種基因型鑒定
        2.4.3 脂阿拉伯甘露聚糖經(jīng)12%SDS-PAGE結(jié)合硝酸銀染色結(jié)果
        2.4.4 分離純化的脂阿拉伯甘露聚糖的鑒定
    2.5 討論
3 北京型結(jié)核分枝桿菌LAM對 T淋巴細(xì)胞免疫功能的影響
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 主要試劑和耗材
        3.2.2 主要儀器設(shè)備
        3.2.3 研究對象來源
        3.2.4 樣本入選
        3.2.5 樣本信息登記
    3.3 實驗方法
        3.3.1 實驗準(zhǔn)備
        3.3.2 檢測不同LAM對 PBMC分泌細(xì)胞因子能力的影響
        3.3.3 ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中
        3.3.4 統(tǒng)計學(xué)方法
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 LAM刺激病人PBMC細(xì)胞因子的分泌結(jié)果
        3.4.2 BJ-LAM刺激對不同分組的PBMC細(xì)胞分泌IL-17
        3.4.3 BJ-LAM刺激PBMC細(xì)胞分泌IL-10、IFN-γ
    3.5 討論
4 結(jié)論
5 本研究的不足之處
6 展望
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號：3998010