發(fā)布時間：2025-04-11 00:38

　　根據(jù)2014年公布的《全國土壤污染狀況公報》,我國因鎘(Cadmium,Cd)的大量使用使其成為土壤中超標率最高的無機污染物。近年來隨著我國蛋雞規(guī)模化養(yǎng)殖的不斷擴大,研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境Cd暴露使得蛋雞養(yǎng)殖過程中暴露出許多問題,其中蛋雞肝臟脂肪沉積、肝臟發(fā)生脂肪變性、非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)等肝臟脂代謝紊亂相關(guān)疾病引起人們的高度重視。線粒體作為機體糖、脂肪、氨基酸代謝的核心細胞器,在維持肝臟脂代謝過程中發(fā)揮著重要作用。線粒體損傷直接導致肝臟脂代謝紊亂,細胞和組織內(nèi)發(fā)生脂肪沉積。PINK1/Parkin介導的線粒體自噬參與損傷線粒體的清除,是控制細胞線粒體數(shù)量及質(zhì)量的主要機制。然而,線粒體自噬在Cd致家禽脂肪沉積中的作用機制尚不明確。本試驗以原代雞胚肝細胞和雞胚肝組織為研究對象,通過蛋白免疫印跡(Western blot)、實時熒光定量(QRT-PCR)、免疫熒光法(Immunofluorescence)等技術(shù)手段,揭示PINK1/Parkin介導的線粒體自噬在Cd致原代雞胚肝細胞和肝組織脂肪變性中的作用。1.Cd對原代雞胚肝細...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語表
第一部分 文獻綜述
    1 非酒精性脂肪肝研究進展
        1.1 非酒精性脂肪肝的致病因素和病變進程
        1.2 非酒精性脂肪肝的流行病學現(xiàn)狀
        1.3 非酒精性脂肪肝相關(guān)易感因素
    2 鎘致非酒精性脂肪肝研究進展
        2.1 鎘致非酒精性脂肪肝的流行病學
        2.2 鎘致非酒精性脂肪肝的致病機制
    3 線粒體自噬
        3.1 線粒體自噬的信號通路及調(diào)控機制
        3.2 線粒體自噬抑制和過度自噬
    4 本研究的目的和意義
第二部分 試驗研究
    第一章 鎘致雞胚肝細胞和肝組織脂肪變性
        1 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要實驗儀器
            1.3 主要實驗試劑
            1.4 主要試劑配制
            1.5 原代雞胚肝細胞體外分離培養(yǎng)
            1.6 鎘處理原代雞胚肝細胞和肝組織
            1.7 雞胚肝組織石蠟切片的制作與HE染色檢測脂滴的生成
            1.8 GPO-PAP法測定原代雞胚肝細胞和肝組織TG含量
            1.9 尼羅紅熒光染色檢測原代雞胚肝細胞內(nèi)脂質(zhì)的含量
            1.10 QRT-PCR檢測原代雞胚肝細胞和肝組織脂代謝相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平
            1.11 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 原代雞胚肝細胞體外培養(yǎng)
            2.2 不同濃度鎘對原代雞胚肝細胞TG含量的影響
            2.3 不同濃度鎘對原代雞胚肝細胞脂代謝限速酶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
            2.4 鎘對原代雞胚肝細胞脂肪滴的影響
            2.5 鎘對原代雞胚肝細胞脂代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
            2.6 不同濃度鎘對雞胚肝組織TG含量的影響
            2.7 不同濃度鎘對雞胚肝組織脂代謝限速酶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
            2.8 鎘對雞胚肝組織脂肪滴含量的影響
            2.9 鎘對雞胚肝組織脂代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3 討論
    第二章 鎘致原代雞胚肝細胞和肝組織線粒體自噬
        1 材料與方法
            1.1 實驗儀器
            1.2 實驗試劑
            1.3 原代雞胚肝細胞體外分離培養(yǎng)
            1.4 鎘處理原代雞胚肝細胞和肝組織
            1.5 透射電鏡觀察原代雞胚肝細胞和肝組織自噬線粒體
            1.6 免疫熒光檢測自噬小體和自噬線粒體
            1.7 流式細胞術(shù)檢測線粒體膜電位
            1.8 Western blot檢測原代雞胚肝細胞和肝組織線粒體自噬相關(guān)蛋白表達水平
            1.9 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
            2.1 鎘對原代雞胚肝細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響
            2.2 鎘對雞胚肝組織線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響
            2.3 鎘對原代雞胚肝細胞線粒體自噬流的影響
            2.4 鎘對原代雞胚肝細胞線粒體膜電位的影響
            2.5 不同濃度鎘對原代雞胚肝細胞線粒體自噬的影響
            2.6 不同濃度鎘對雞胚肝組織線粒體自噬的影響
        3 討論
    第三章 PINK1/Parkin介導的線粒體自噬在鎘致原代雞胚肝細胞和肝臟脂肪變性中的作用
        1 材料與方法
            1.1 實驗儀器
            1.2 主要實驗試劑
            1.3 原代雞胚肝細胞體外分離培養(yǎng)
            1.4 CsA與Cd單獨或共處理原代雞胚肝細胞和肝組織
            1.5 透射電鏡觀察原代雞胚肝細胞和肝組織線粒體超微結(jié)構(gòu)
            1.6 Mito-tracker檢測細胞內(nèi)線粒體數(shù)目的變化
            1.7 JC-1檢測細胞內(nèi)線粒體細胞線粒體膜電位的變化
            1.8 Western blot檢測原代雞胚肝細胞和肝組織線粒體自噬相關(guān)蛋白
            1.9 GPO-PAP法測定原代雞胚肝細胞和肝組織TG含量
            1.10 尼羅紅染色檢測細胞內(nèi)脂肪滴
            1.11 HE染色檢測組織內(nèi)脂肪滴
            1.12 QRT-PCR檢測原代雞胚肝細胞和組織內(nèi)脂代謝相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平
            1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2 結(jié)果
            2.1 CsA對鎘致原代雞胚肝細胞線粒體自噬的影響
            2.2 CsA對鎘致原代雞胚肝細胞脂代謝紊亂的影響
            2.3 CsA對鎘致雞胚肝組織線粒體自噬的影響
            2.4 CsA對鎘致雞胚肝組織脂代謝紊亂的影響
        3 討論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：4039232