發(fā)布時(shí)間：2025-04-15 03:08

　　 Rab5a是胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,而恒定鏈（invariant chain, Ii）則是協(xié)助主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex, MHC）Ⅱ分子裝配成熟以及遞呈抗原肽的免疫分子。長(zhǎng)期以來(lái),Ii的胞內(nèi)途徑機(jī)制并不清楚。本研究旨在探明雞（Gallus gallus） Rab5a的結(jié)構(gòu)特征及參與Ii在胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用。首先,用自行設(shè)計(jì)的引物克隆雞Rab5a基因（GenBank No. XM₀15281490）,構(gòu)建含雞cIi、cIi突變體(Ii_D81-87aa和Ii_D91-99aa)的重組表達(dá)載體;其次,應(yīng)用軟件比對(duì)雞和小鼠（Mus musculus） Rab5a蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。最后,分別將Rab5a和cIi轉(zhuǎn)染小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞系DC2.4細(xì)胞,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)和激光共聚焦顯微鏡觀察雞Rab5a與cIi和c Ii_D81-87aa和cIi_D91-99aa在真核細(xì)胞內(nèi)的定位與共定位。應(yīng)用GST pull-down和Western blot檢測(cè)雞Rab...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 引物設(shè)計(jì)與合成
    1.3 目的基因的克隆與鑒定
    1.4 Rab5a的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析
    1.5 構(gòu)建重組質(zhì)粒
    1.6 細(xì)胞培養(yǎng)、真核轉(zhuǎn)染、免疫熒光染色和共聚焦顯微鏡觀察
    1.7 重組菌的構(gòu)建、表達(dá)和鑒定
    1.8 表達(dá)蛋白的純化與GST pull-down檢測(cè)目的蛋白間的相互作用
2 結(jié)果與分析
    2.1 目的基因的克隆與鑒定
    2.2 雞和小鼠Rab5a的結(jié)構(gòu)分析與比較
    2.3 雞Rab5a和Ii在真核細(xì)胞中的定位特征
    2.4 雞Ii與Rab5a共定位的分子結(jié)構(gòu)特征
    2.5 雞Rab5a和Ii基因原核表達(dá)的分子免疫學(xué)特征
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：4039973