發(fā)布時(shí)間：2025-04-27 02:15

　　深入了解乳腺發(fā)育與泌乳的分子機(jī)制對于改善奶的生產(chǎn)能力有重要的指導(dǎo)意義，為找到miRNA在泌乳期乳腺的生長發(fā)育及泌乳過程中發(fā)揮的基因表達(dá)調(diào)控作用，本研究根據(jù)已有的嶗山奶山羊不同泌乳時(shí)期miRNA表達(dá)譜及奶牛乳腺組織轉(zhuǎn)錄本數(shù)據(jù)，通過聚類分析、靶基因預(yù)測及功能注釋等數(shù)據(jù)挖掘和生物信息學(xué)分析方法，對其中差異表達(dá)的miRNA做了乳腺發(fā)育相關(guān)的生物學(xué)解釋。經(jīng)生物信息學(xué)分析后，以嶗山奶山羊單克隆乳腺分泌上皮細(xì)胞為試驗(yàn)材料，通過載體構(gòu)建和細(xì)胞轉(zhuǎn)染，利用qRT-PCR、雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)及Western-blot等方法驗(yàn)證miR-135a與PRLR基因的靶向關(guān)系。主要研究結(jié)果如下： （1）通過對miRNA在三個(gè)時(shí)期高通量測序表達(dá)譜中表達(dá)量的差異分析，在不同泌乳時(shí)期篩選到差異表達(dá)miRNA共有66個(gè)，其表達(dá)模式被聚為6類； （2）以奶牛不同泌乳期乳腺組織轉(zhuǎn)錄本為基礎(chǔ)，經(jīng)TargetScan6.2軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測后，共獲得62個(gè)miRNA調(diào)控的候選靶基因813個(gè)； （3）通過功能注釋，共對804條序列進(jìn)行了GO注釋，其中有8個(gè)基因直接注釋到乳腺發(fā)育功能，分別為PRLR、TGFBR2、ERBB...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 MicroRNA 的研究進(jìn)展
        1.1.1 miRNA 的基本特征及作用機(jī)制
        1.1.2 miRNA 的鑒定
        1.1.3 miRNA 靶基因的預(yù)測及驗(yàn)證
        1.1.4 乳腺發(fā)育及泌乳相關(guān) miRNA 的研究進(jìn)展
        1.1.5 miR-135a 的在動(dòng)物中的研究進(jìn)展
    1.2 乳腺發(fā)育、泌乳及退化相關(guān)功能基因及通路
        1.2.1 GO 注釋與 KEGG 注釋
        1.2.2 JAK-STAT 信號通路
    1.3 PRLR 研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的意義
2 材料和方法
    2.1 數(shù)據(jù)挖掘與分析
        2.1.1 試驗(yàn)數(shù)據(jù)
        2.1.2 主要數(shù)據(jù)庫及生物分析軟件
        2.1.3 差異表達(dá) miRNA 的篩選與聚類
        2.1.4 差異表達(dá) miRNA 的靶基因的預(yù)測
        2.1.5 miRNA 及靶基因的生物信息學(xué)分析
    2.2 分子試驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 菌株、載體和細(xì)胞
        2.2.2 主要儀器設(shè)備
        2.2.3 主要試劑及來源
        2.2.4 常用試劑的配置
        2.2.5 miR-135a 真核表達(dá)載體及 PRLR 報(bào)告基因載體構(gòu)建
        2.2.6 重組載體去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取
        2.2.7 乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.8 熒光定量 PCR 檢測 mir-135a 及 PRLR 基因表達(dá)量
        2.2.9 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證 miR-135a 與 PRLR 靶向關(guān)系
        2.2.10 Western blot 檢驗(yàn) PRLR 蛋白表達(dá)量變化
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 miRNA 表達(dá)譜的數(shù)據(jù)挖掘及生物信息學(xué)分析
        3.1.1 差異表達(dá) miRNA 的篩選與聚類
        3.1.2 差異表達(dá) miRNA 的靶基因預(yù)測
        3.1.3 miRNA 靶基因的生物信息學(xué)分析
    3.2 miR-135a 與 PRLR 靶向關(guān)系分析
        3.2.1 miR-135a 靶基因的生物信息學(xué)預(yù)測
        3.2.2 miR-135a 真核表達(dá)載體及 PRLR 報(bào)告基因載體構(gòu)建
        3.2.3 熒光定量 PCR 檢測 mir-135a 及其靶基因 PRLR 表達(dá)量
        3.2.4 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證 miR-135a 與 PRLR 靶向關(guān)系
        3.2.6 miR-135a 對 PRLR 蛋白表達(dá)的影響
4 討論
    4.1 乳腺發(fā)育過程中 miRNA 的表達(dá)模式與其功能的相關(guān)性
    4.2 miRNA 靶基因預(yù)測及其功能預(yù)測的關(guān)系
    4.3 乳腺發(fā)育及泌乳相關(guān)的 miRNA 及其靶基因
    4.4 miR-135a 對乳腺發(fā)育及泌乳的調(diào)節(jié)作用
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況



本文編號：4041720