布魯氏菌病(Brucellosis)是由胞內寄生菌布氏桿菌屬侵入機體引起的一種人和動物都能感染的細菌性傳染病,簡稱布病。世界上大部分地區(qū)都有布魯氏菌病的發(fā)生,成為嚴重威脅人類健康和經濟發(fā)展的問題。近年來,布魯氏菌病的流行越來越嚴重,我國也不例外,進行布魯氏菌病的防控顯得尤為重要,免疫接種是預防布魯氏菌病的一個重要手段,目前常用的疫苗主要是布魯氏菌弱毒活疫苗,這些疫苗雖具有良好的保護能力,但其也存在不足之處,如具有一定毒性、易感染人,而且干擾血清學檢測,導致無法區(qū)分自然感染動物與免疫動物等,因此,研究一種更好的布病新型疫苗越來越重要。乳酸乳球菌表達系統是一種安全、高效的表達系統,經常應用于亞單位疫苗的制作,本研究將布魯氏菌Omp10、Omp28、L7/L12三個優(yōu)勢抗原基因串聯后導入乳酸乳球菌表達系統中,構建能夠表達布魯氏菌融合蛋白Omp10-Omp28-L7/L12的乳酸乳球菌免疫制劑。乳酸乳球菌是自然界中常見的益生菌種,是公認的安全級微生物,且乳酸乳球菌可以長時間定植在腸道,刺激機體黏膜免疫反應從而引起全身免疫反應。因此本試驗選用乳酸乳球菌表達系統,首先利用PCR技術擴增公司合成的Om...

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【學位級別】：碩士

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圖2電轉化后結果

圖2電轉化后結果Fig.2TheresultofelectroporationL7/L12融合基因重組乳酸乳球菌表達載體取陽性菌落并提取質粒，對重組表達質粒異性條帶大小約為2109bp，與預期大小一鑒定結果正確（圖4），公司測序結果也

圖3重組質粒PCR鑒定

鑒定結果正確（圖4），公司測序結果也與參考序列相符，說明菌構建成功。序列正確的重組質粒命名為pNZ8148-8-L7/L12，對應的重組乳酸菌命名為pNZ8148-8-L7/L12/NZ9000。

圖4重組表達質粒pNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12雙酶切鑒定

48-Omp10-Omp28-L7/L12雙酶切鑒定圖.M:DNAmarker.1:酶combinantplasmidpNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12byNcoIarker.1:Pre-cleavageplasmid..2:Plasmid....

圖.M:DNAmarker.1:酶切前質粒.2:酶切后質粒Fig.4DigestionofrecombinantplasmidpNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12byNcoIandXbaI.M:DNAmarker.1:Pre-cleavageplasmid..2:Plasmidafterenzymaticdigestion

融合蛋白在乳酸乳球菌中的表達及其免疫效果初步研究24圖4重組表達質粒pNZ8148-Omp10-Omp28-L7/L12雙酶切鑒定圖.M:DNAmarker.1:酶切前質粒.2:酶切后質粒Fig.4Digestionofrecombinantplasmidp....

本文編號：4054757