背景與目的:特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種常見的呼吸內科疾病,通常表現(xiàn)為肺功能下降,漸進性勞力性呼吸困難,咳嗽少痰,發(fā)紺,出現(xiàn)胸痛及杵狀指,病情進一步發(fā)展較為嚴重的患者最終可能會死于呼吸衰竭,通常IPF患者疾病診斷后的生存時間均不足5年。近年來的研究指出IPF疾病的發(fā)生和發(fā)展具有流行病學的部分特征,存在家族易感性,與基因突變相關等,目前大多數(shù)的機制研究都表明IPF的發(fā)生及進展過程是上皮細胞損傷和異常損傷修復途徑的激活所導致的,這種損傷后持續(xù)的上皮異常修復使得上皮細胞不斷地向間質細胞發(fā)生轉變,另外在細胞的轉變過程中也會分泌其他生長因子,例如轉化生長因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、血小板衍生細胞因子(platelet-de-rived growth factor,PDGF)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等,這些作用于多條信號通路的細胞因子的增加使得信號通路也過度激活,造成肌成纖維細胞在間質中過度沉積,加速疾病...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 前言
    1.1 特發(fā)性肺纖維化概述
    1.2 骨髓間充質干細胞
    1.3 Sirt6 基因
    1.4 研究問題和目的
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 其他
        2.1.4 實驗試劑
    2.2 主要試劑的配制
        2.2.1 10%水合氯醛溶液的配制
        2.2.2 10%BMSCs完全培養(yǎng)基
        2.2.3 10%DMSO BMSCs凍存液
        2.2.4 1×電泳液
        2.2.5 1×轉膜緩沖液
        2.2.6 1×TBST緩沖液
        2.2.7 5%脫脂奶粉封閉液
        2.2.8 細胞蛋白提取裂解液
        2.2.9 10%SDS溶液
        2.2.10 10%過硫酸銨
        2.2.11 SDS-PAGE的凝膠配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 IPF與 SIRT6 之間的聯(lián)系
        2.3.2 BMSCs的體外分離培養(yǎng)和鑒定
        2.3.3 SIRT6 慢病毒侵染大鼠BMSCs
        2.3.4 Western Blot法檢測慢病毒轉染BMSCs后 SIRT6 蛋白表達
        2.3.5 qPCR檢測慢病毒轉染BMSCs后 SIRT6 mRNA表達
        2.3.6 TGF-β1 誘導BMSCs肺纖維化預實驗
    2.4 統(tǒng)計學方法
第3章 結果
    3.1 基于GEO數(shù)據庫的SIRT6 變化規(guī)律
    3.2 BMSCs的形態(tài)觀察及鑒定
    3.3 慢病毒侵染細胞的最佳MOI值
    3.4 LV-GFP和 LV-SIRT6 侵染BMSCs
    3.5 Western-Blot檢測轉染后BMSCs中 SIRT6 的表達
    3.6 QPCR檢測慢病毒轉染后SIRT6 基因的表達
    3.7 QPCR檢測不同濃度TGF-β1 刺激BMSC后 SIRT6 基因及纖維化基因表達
    3.8 Western-Blot檢測TGF-β1 刺激LV-GFP、LV-SIRT6 及空白處理control組三組的相關纖維化因子的表達
    3.9 QPCR檢測TGF-β1 刺激LV-GFP、LV-SIRT6 及空白處理control組三組的相關纖維化因子的表達
    3.10 對差異基因進行富集分析
第4章 討論
第5章 結論與展望
    5.1 結論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    References



本文編號：4002756