【背景】YycFG雙組分系統(tǒng)是肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae,S. pn）應(yīng)對外界環(huán)境的重要信息傳遞系統(tǒng),其中表達反應(yīng)調(diào)節(jié)子YycF的編碼基因是肺炎鏈球菌生長的必需基因,但其是否調(diào)控細(xì)菌毒力尚不清楚。【目的】構(gòu)建肺炎鏈球菌pcsB組成型表達及yycF缺陷菌,分析YycF對肺炎鏈球菌生物學(xué)特征和毒力的影響�！痉椒ā坎捎肑anus cassette （JC）反選的方法構(gòu)建pcsB組成型表達菌株（Pc-PcsB⁺）,從該菌株出發(fā)用替代失活的方法構(gòu)建yycF缺陷菌株（Pc-PcsB⁺DyycF）,比較野生株D39rpsl41、pcsB組成型表達株及yycF缺陷株的生長特性、莢膜多糖（capsular polysaccharide,CPS）含量、粘附侵襲能力和致病性的差異。【結(jié)果】成功構(gòu)建pcsB組成型表達的yycF缺陷菌株（Pc-PcsB+DyycF）;yycF缺陷導(dǎo)致細(xì)菌生長緩慢、分裂異常、胞內(nèi)莢膜多糖和小分子莢膜多糖增多;體外實驗結(jié)果顯示,yycF缺陷菌株粘附能力較Pc-PcsB⁺菌株減弱（P=...

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【部分圖文】：

圖1 Pc-PcsB+(35)yyc F菌株構(gòu)建原理示意圖

通過pcsB組成型表達構(gòu)建肺炎鏈球菌yycF缺陷均(圖1)，通過PCR重組得到mreCD-JC-Pc-pcsB/1(3404bp)和mreD-Pc-pcsB/2(1202bp)片段(圖2A、B)，利用肺炎鏈球菌自然轉(zhuǎn)化，將帶同源臂的連接片段mreCD-JC-Pc-pc....

圖2 PCR鑒定Pc-PcsB+菌株

圖1Pc-PcsB+(35)yycF菌株構(gòu)建原理示意圖成功插入JC-Pc片段后，再次利用同源重組敲除JC片段(圖1A)。當(dāng)JC片段置換出來后，用鏈霉素抗性血平板篩選陽性菌株。以Pr1001、Pr1008引物進行PCR擴增，JC-Pc-PcsB+菌株擴增出3404bp大小的....

圖3 PCR鑒定Pc-PcsB+(35)yyc F菌株

生長曲線結(jié)果顯示，Pc-PcsB+的生長較D39rpsl41緩慢，Pc-PcsB+(35)yycF與Pc-PcsB+相比生長顯著遲緩(圖4A),3個菌株在血平板上的菌落形態(tài)無顯著差異(圖4B-D)。鏡下觀察細(xì)菌未染色和革蘭染色標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)Pc-PcsB+(35)yycF有明顯....

圖4 D39rpsl41、Pc-PcsB+、Pc-PcsB+(35)yycF生長曲線和形態(tài)

圖3PCR鑒定Pc-PcsB+(35)yycF菌株2.4D39rpsl41、Pc-PcsB+、Pc-PcsB+(35)yycF菌株中pcsB基因的轉(zhuǎn)錄水平和yycF上下游基因的轉(zhuǎn)錄水平

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