目的:牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）是慢性牙周炎重要的可疑致病菌,并且可內(nèi)化入各種宿主細胞內(nèi),進而參與全身性疾病的發(fā)生和發(fā)展過程。骨化三醇(1α,25-二羥維生素D3,1α,25（OH）₂D₃,以下簡稱1,25D)可通過促進自噬降低上皮細胞和單核細胞內(nèi)P.gingivalis的數(shù)量。本研究進一步觀察1,25D對內(nèi)化于U937巨噬細胞P.gingivalis活菌數(shù)量的影響,并通過觀察U937巨噬細胞內(nèi)P.gingivalis與自噬體和溶酶體的共定位情況,U937巨噬細胞自噬形成情況等進一步探討1,25D對U937巨噬細胞內(nèi)P.gingivalis的作用和相關機制。方法:1、PMA誘導U937單核細胞系為巨噬細胞。2、抗生素保護法建立P.gingivalis內(nèi)化U937巨噬細胞研究模型。3、RT-PCR法檢測1,25D對內(nèi)化U937巨噬細胞內(nèi)P.gingivalis活菌數(shù)量的影響。4、1,25D及P.gingivalis對U937巨噬細胞自噬的影響。分別用P.gingivalis、1,2...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1 PMA誘導U937細胞分化為U937巨噬細胞。

將對數(shù)生長期的U937細胞接種于6孔板,細胞密度為2×105/mL,每孔2mL。加入PMA儲存液(終濃度100ng/mL)至細胞培養(yǎng)孔,輕搖混勻,于37°C,5%CO2孵箱中培養(yǎng)48h。去除含PMA培養(yǎng)液,PBS沖洗3次,加入2ml培養(yǎng)液,培養(yǎng)24～48h后進行后續(xù)實....

圖2 骨化三醇(1,25D)對P.gingivalis內(nèi)化U937巨噬細胞自噬的影響實驗流程圖

綜合2.2.4和2.2.5中的實驗結(jié)果,如圖2所示,P.gingivalis組及1,25D+P.gingivalis組分別加入MOI值100:1的P.gingivalis共培養(yǎng)6h后,建立P.gingivalis內(nèi)化U937巨噬細胞模型。1,25D組及1,25D+P.gingi....

圖3 自噬在骨化三醇(1,25D)對內(nèi)化U937巨噬細胞P.gingivalis ATCC 33277活菌數(shù)量的影響實驗流程圖

實驗流程圖如圖3所示。實驗組和對照組分別加入MOI值100:1P.gingivalis,建立P.gingivalis內(nèi)化巨噬細胞模型,對照組加入0.1%乙醇,實驗組分別加入10-8mol/L1,25D、3-MA+0.1%乙醇、10-8mol/L1,25D+3-MA,18h....

圖4 不同濃度骨化三醇(1,25D)對U937巨噬細胞內(nèi)活菌數(shù)量的影響

不同濃度的1,25D作用于P.gingivalis內(nèi)化后的巨噬細胞,RT-PCR法檢測巨噬細胞內(nèi)活菌相對數(shù)量,結(jié)果如圖4,與對照組組比較,隨1,25D濃度的增加,巨噬細胞內(nèi)活菌相對數(shù)量逐漸減少。其中,10-12mol/L組、10-10mol/L組及10-8mol/L組與對照組相比....

本文編號：4047664