目的：構(gòu)建五種具有膀胱腫瘤特異性的雙啟動子重組真核表達(dá)載體,每種載體皆包含尿路斑塊蛋白2(UroplakinⅡ, UPⅡ)啟動子控制的單純皰疹病毒胸腺激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase, HSV-TK)、并分別搭配人白細(xì)胞介素2(interleukin-2, IL-2).腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-inducing, TRAIL)、融合基因IL-2-TNF-α、融合基因IL-2-TRAIL。 方法：以實(shí)驗(yàn)室保存的各種質(zhì)粒為模板通過常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(Polymerase Chain Reaction,PCR)分別擴(kuò)增出UPⅡ啟動子及HSV-TK基因、IL-2基因、TNF-α基因、TRAIL基因。用重疊延伸拼接技術(shù)將IL-2分別與TNF-α、TRAIL融合為融合基因IL-2-TNF-α(IT)、IL-2-TRAIL(ITR)。以上PCR所得各基因片段分別連接到真核載...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
前言
材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 質(zhì)粒、載體和細(xì)菌菌株
        1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑盒
        1.1.4 儀器及設(shè)備
        1.1.5 主要溶液及配制
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 目的基因擴(kuò)增
        1.2.3 目的基因的克隆及測序
        1.2.4 構(gòu)建共表達(dá)自殺基因和細(xì)胞因子基因的雙啟動子載體
結(jié)果
    2.1 目的基因擴(kuò)增結(jié)果
    2.2 目的基因的克隆及測序結(jié)果
        2.2.1 目的基因的克隆結(jié)果
        2.2.2 目的基因的測序結(jié)果
    2.3 pBud-UPⅡ/CMV、pBud-UPⅡ-TK/CMV的鑒定
    2.4 共表達(dá)自殺基因和細(xì)胞因子基因雙啟動子載體的鑒定
        2.4.1 pBud-UPⅡ-TK/CMV-IL-2的鑒定
        2.4.2 pBud-UPⅡ-TK/CMV-TNF-α的鑒定
        2.4.3 pBud-UPⅡ-TK/CMV-TRAIL的鑒定
        2.4.4 pBud-UPⅡ-TK/CMV-IT的鑒定
        2.4.5 pBud-UPⅡ-TK/CMV-ITR的鑒定
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
成果
參與課題
致謝



本文編號：4051696