目的：研究miR-200a在膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移侵襲中的作用及其機(jī)制。 方法：結(jié)合本課題組前期的研究結(jié)果，利用real-time PCR檢測(cè)miR-200a在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和組織中的表達(dá)；將miR-200a的模擬物及抑制劑轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞后，進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)，分別檢測(cè)miR-200a對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力的影響。利用在線miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)miR-200a的靶基因，并用DAVID在線基因功能軟件進(jìn)行歸類分析；利用Westernblot實(shí)驗(yàn)和熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)對(duì)所預(yù)測(cè)的潛在靶基因進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。 結(jié)果：Real-time PCR結(jié)果提示，相對(duì)于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞，miR-200a在高級(jí)別膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中顯著高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這與本課題組前期的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞miRNA芯片結(jié)果一致。過表達(dá)miR-200a可促進(jìn)U87細(xì)胞的遷移侵襲能力(P<0.05)，而抑制miR-200a的表達(dá)則結(jié)果相反。過表達(dá)或抑制miR-200a對(duì)U87細(xì)胞增殖能力均無顯著影響，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。利用DA...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 Real-time PCR 檢測(cè) miR-200a 在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞和組織中的表達(dá)
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及常用溶液配制
        1.4 主要試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 膠質(zhì)瘤細(xì)胞和組織的 miRNA 提取、逆轉(zhuǎn)錄和 Real-time PCR
    3 結(jié)果
第二部分 miR-200a 對(duì) U87 細(xì)胞遷移、侵襲及增值的影響
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及常用溶液配制
        1.4 主要試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 miR-200a 抑制劑和模擬物轉(zhuǎn)染 U87 細(xì)胞
        2.3 Transwell 細(xì)胞侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)
        2.4 劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.5 MTS 檢測(cè) miR-200a 對(duì) U87 細(xì)胞增值的影響
        2.6 MTS檢測(cè)miR-200a對(duì)U87細(xì)胞增值的影響
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
第三部分 miR-200a 的靶基因預(yù)測(cè)、篩選和驗(yàn)證
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑及常用溶液配制
        1.4 主要試劑的配制(其余同前)
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 miR-200a 的靶基因預(yù)測(cè)、歸類分析
        2.2 Western blot 檢測(cè) miR-200a 是否調(diào)節(jié)目標(biāo)靶基因蛋白表達(dá)
        2.3 使用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析驗(yàn)證 miR-200a 的潛在靶基因
    3 結(jié)果
        3.1 miR-200a的靶基因預(yù)測(cè)、歸類分析
        3.2 Western blot分析驗(yàn)證miR-200a調(diào)控靶基因PTEN和NCAM1的蛋白表達(dá)
        3.3 使用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析驗(yàn)證miR-200a的潛在靶基因
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：4004426