腦膠質(zhì)瘤是臨床發(fā)病率最高的腦腫瘤,是威脅人類健康的主要疾病之一,具有高復(fù)發(fā)率和高死亡率的特點(diǎn)。由于腦膠質(zhì)瘤自身生長具有浸潤性以及血腦屏障(BBB)的存在,使得常規(guī)的治療方案包括手術(shù)切除、放療或化療均難以取得理想的治療效果。烷化劑類抗腫瘤藥物卡莫司汀(Carmustine, BCNU)通過將腫瘤細(xì)胞DNA鳥嘌呤上的第六位氧原子烷基化,促使DNA鏈間產(chǎn)生交聯(lián),從而影響DNA復(fù)制。但是由于腫瘤細(xì)胞中存在DNA修復(fù)酶,尤其是O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉(zhuǎn)移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT),它可以將DNA鳥嘌呤上的烷基轉(zhuǎn)移到自身,修復(fù)腫瘤細(xì)胞,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)BCNU產(chǎn)生耐藥性。06-芐基鳥嘌呤(O6-Benzylguanine, BG),通過直接消耗細(xì)胞中MGMT,達(dá)到有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)烷化劑耐藥性的作用。本課題以烷化劑BCNU為模型藥物、BG為抗腫瘤增敏劑,采用可生物降解的乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)和殼聚糖(CS)為納米粒載體材料,制備核殼型雙層納米粒(PLGA/CS NPs)。以載有BCNU的PLGA為內(nèi)核,分散有BG的C...

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 BCNU與其增敏劑BG的處方前研究
    第一節(jié) BCNU和BG的處方前研究
        1 材料和儀器
            1.1 材料和試劑
            1.2 儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 UV法確定檢測(cè)波長
            2.2 BCNU和BG含量測(cè)定分析方法的建立
            2.3 考察BCNU在不同條件下的穩(wěn)定性
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 UV法確定檢測(cè)波長
            3.2 BCNU和BG含量測(cè)定分析方法的建立
            3.3 考察BCNU在不同條件下的穩(wěn)定性
    第二節(jié) BCNU與其增敏劑BG的體外抗腫瘤活性
        1 材料和儀器
            1.1 材料和試劑
            1.2 儀器
            1.3 細(xì)胞株
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 MTT法考察細(xì)胞毒性
            2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 BG細(xì)胞毒性考察
            3.2 BG給藥濃度和時(shí)間對(duì)增敏作用的影響
            3.3 BCNU和BG聯(lián)合給藥對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性
            3.4 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        4 討論
            4.1 BG增敏作用與MGMT活性、給藥濃度和給藥時(shí)間的關(guān)系
            4.2 BCNU的穩(wěn)定性
        5 小結(jié)
第二章 (BCNU+BG)-PLGA/CS雙層納米粒的制備和表征
    1 材料和儀器
        1.1 材料和試劑
        1.2 儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 BCNU納米粒的制備和工藝優(yōu)化
        2.2 BCNU+BG納米粒的制備
        2.3 納米粒理化性質(zhì)的表征
        2.4 納米粒中BCNU和BG的測(cè)定
        2.5 載藥量和包封率測(cè)定
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 納米粒中BCNU和BG的測(cè)定
        3.2 BCNU納米粒的單因素考察和正交設(shè)計(jì)優(yōu)化
        3.3 (BCNU+BG)-PLGA/CS納米粒的包封率和載藥量測(cè)定
        3.4 納米粒形態(tài)
        3.5 納米粒的粒徑與Zeta電位
    4 討論
        4.1 殼聚糖吸附到PLGA納米粒表面的機(jī)理
        4.2 BCNU與BG的聯(lián)合給藥
    5 小結(jié)
第三章 PLGA/CS納米粒的體外評(píng)價(jià)
    第一節(jié) PLGA/CS載藥納米粒的體外評(píng)價(jià)
        1 材料和儀器
            1.1 材料和試劑
            1.2 儀器
            1.3 細(xì)胞株
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 體外釋放
            2.2 體外血漿中穩(wěn)定性
            2.3 溶血毒性考察
            2.4 細(xì)胞毒性考察
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 體外釋放
            3.2 體外血漿中穩(wěn)定性
            3.3 溶血毒性考察
            3.4 細(xì)胞毒性考察
    第二節(jié) 熒光探針標(biāo)記的納米粒的制備、表征和體外研究
        1 材料和儀器
            1.1 材料和試劑
            1.2 儀器
            1.3 細(xì)胞株
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 香豆素6的HPLC分析方法
            2.2 香豆素6納米粒的制備
            2.3 香豆素6作為熒光探針可行性考察
            2.4 定性考察細(xì)胞攝取
            2.5 定量考察細(xì)胞攝取
            2.6 細(xì)胞攝取機(jī)理
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 香豆素6的HPLC分析方法
            3.2 香豆素6納米粒的表征
            3.3 納米粒中香豆素6的測(cè)定
            3.4 載藥量和包封率
            3.5 香豆素6作為熒光探針可行性考察
            3.6 定性考察細(xì)胞攝取
            3.7 定量考察細(xì)胞攝取
            3.8 細(xì)胞攝取機(jī)理
        4 討論
            4.1 (BCNU+BG)-PLGA/CS納米粒的體外釋放
            4.2 載藥納米粒的細(xì)胞毒性
            4.3 香豆素6作為熒光探針的可行性
            4.4 細(xì)胞攝取機(jī)理
        5 小結(jié)
第四章 PLGA/CS雙層納米粒的體內(nèi)分布
    1 材料和儀器
        1.1 材料和試劑
        1.2 儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 細(xì)胞株
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 藥動(dòng)學(xué)和組織分布
        2.2 血漿和組織樣品中香豆素6含量分析方法的建立
        2.3 血漿和組織樣品中BG含量分析方法的建立
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 血漿和組織樣品中香豆素6含量分析方法的建立
        3.2 血漿和組織樣品中BG含量分析方法的建立
        3.3 Fischer344大鼠的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)
        3.4 F98荷瘤大鼠的組織分布
    4 討論
        4.1 影響PLGA/CS納米粒藥動(dòng)學(xué)和組織分布的因素
        4.2 納米遞藥系統(tǒng)跨越血腦屏障
    5 小結(jié)
第五章 納米粒的藥效學(xué)和安全性評(píng)價(jià)
    1 材料和儀器
        1.1 材料和試劑
        1.2 儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 細(xì)胞株
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 F98荷瘤大鼠的模型建立
        2.2 原位腦膠質(zhì)瘤模型的驗(yàn)證
        2.3 藥效學(xué)和安全性評(píng)價(jià)
        2.4 F98荷瘤大鼠MRI影像學(xué)觀察
        2.5 腫瘤的病理學(xué)觀察
        2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 原位腦膠質(zhì)瘤模型的驗(yàn)證
        3.2 F98荷瘤大鼠體內(nèi)抗腫瘤活研究
        3.3 腫瘤組織的HE染色觀察
        3.4 TUNEL法檢測(cè)組織水平的凋亡
    4 討論
        4.1 F98腦膠質(zhì)瘤模型
        4.2 核磁共振成像
        4.3 BCNU+BG納米粒的抗腫瘤活性
    5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
在校期間已獲成果



本文編號(hào)：4045359