研究目的:端粒是控制細(xì)胞增殖與衰老凋亡的生物鐘,分化成熟的正常人體細(xì)胞不表達(dá)端粒酶,因次端粒隨細(xì)胞分離次數(shù)增加逐漸縮短。端粒酶異常再表達(dá)及活化與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān),約90%以上惡性腫瘤有端粒酶再表達(dá)及活化。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)是人端粒酶的催化亞單位及決定其活性的關(guān)鍵因素。hTERT對端粒酶活性的調(diào)控分為轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控和hTERT pre-mRNA選擇性剪接調(diào)控,即轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控。α和β兩個位點的缺失是目前hTERT pre-mRNA剪接調(diào)控中研究較多的位點。hTERT pre-mRNA序列上存在著外顯子剪接增強子(ESE)序列,反義寡核苷酸與之相結(jié)合可誘導(dǎo)外顯子跳躍,改變選擇性剪接模式。本研究應(yīng)用反義寡核苷酸與hTERT pre-mRNA中的外顯子剪接增強子結(jié)合,調(diào)控其剪接模式,減少全長型hTERT mRNA的表達(dá),抑制端粒酶活性,從而影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和侵襲。旨在探討hTERT pre-mRNA的選擇性剪接對端粒酶活性的調(diào)節(jié)作用,為新一代端粒酶抑制劑研發(fā)提供新思路及參考依據(jù)。研究方法:第一部分:以膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本為研究對象,采用RT-PCR方法檢測hTER...

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１選擇性剪接的種類和方式，產(chǎn)生多種蛋白質(zhì)產(chǎn)物

選擇性剪接（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ）又被稱為可變剪接或變位剪接，是指真核細(xì)??胞中基因轉(zhuǎn)錄形成的初始ｍＲＮＡ?（ｐｒｅ－ｍＲＮＡ），通過不同剪接方式產(chǎn)生不同拼接??形式的成熟ｍＲＮＡ剪接變異體（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ?ｖａｒｉａｎｔｓ，ＡＳＶｓ....

圖２?ｈＴＥＲＴ?ｐｒｅ－ｍＲＮＡ選擇性剪接模式圖

各種ｈＴＥＲＴ?ＡＳＶｓ的作用和功能尚不十分清楚。ａ缺失（－ａ）?ｈＴＥＲＴ?ＡＳＶ??缺失外顯子６中的３６個核巧酸；Ｐ缺失（－Ｐ）?ｈＴＥＲＴ?ＡＳＶ缺失了全部外顯子７??和全部外顯子８的１８２個核巧酸（ａ和Ｐ缺失位點如圖２所示）；Ｙ缺失ｈＴＥＲＴ??ＡＳＶ缺失了外顯子１１中的....

圖３端粒酶抑制劑ＧＲＮｌ抗Ｌ的化學(xué)結(jié)構(gòu)??３．外顯子跳躍（Ｅｘｏｎ－ｓｋｉｐｐｉｎｇ）技術(shù)及其應(yīng)用：??與外顯子增強子（ｅｘｏｎ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ?ｅｎｈａｎｃｅｒ，?ＥＳＥ）序列互補的反義寡核昔酸??

端粒酶抑制劑ＧＲＮ１６３Ｌ通過特異性與端粒酶模板ＲＮＡ活性部位結(jié)合抑制??端粒酶活性，現(xiàn)在己經(jīng)進(jìn)入了?Ｉ／ＩＩ期臨床試驗階段。臨床前研究表明，ＧＲＮ１６３Ｌ??的體內(nèi)端粒酶活性抑制率可達(dá)到５０－７５％，?ＧＲＮ１６３Ｌ的化學(xué)結(jié)構(gòu)詳見圖３。盡管??在某些惡性腫瘤患者用ＧＲＮ１６３Ｌ....

圖４反義寡棱脊酸（ＡＯ）調(diào)控選擇性剪接外顯子跳躍（ｅｘｏｎ?ｓｋｉｐｐｉｎｇ）的原理

（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ?ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，?ＡＯ），可Ｗ改變轉(zhuǎn)錄后ｐｒｅ－ｍ民ＮＡ的選擇性剪接位點的??使用，從而改變剪接�？私閷�(dǎo)外顯子跳躍。ＡＯ調(diào)控選擇性剪接外顯子跳躍的??原理如圖４所示。它是一種新的基因治療技術(shù)，已經(jīng)應(yīng)用在臨床試驗中治療杜巧??肌營養(yǎng)不良（ＤＭＤ....

本文編號：4056672