目的 本文通過對NGFβ/HIF-1α雙基因轉(zhuǎn)染表達(dá)對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及其安全性評價(jià)的研究，為應(yīng)用組織工程學(xué)方法治療脊髓損傷奠定基礎(chǔ)。 方法 首先，復(fù)蘇SD大鼠BMSCs，采用貼壁培養(yǎng)法將SD大鼠BMSCs傳代培養(yǎng)，取細(xì)胞融合率達(dá)85%以上的BMSCs用于實(shí)驗(yàn)研究。然后，分別構(gòu)建編碼NGFβ、HIF-1α表達(dá)基因的慢病毒載體，測定最佳感染復(fù)數(shù)，用最佳感染復(fù)數(shù)的攜載目的基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染BMSCs，Western blot檢測基因轉(zhuǎn)染后NGFβ和HIF-1α表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)共分五組：A組，空白對照組；B組，空載慢病毒組；C組，NGFβ單基因轉(zhuǎn)染組；D組，HIF-1α單基因轉(zhuǎn)染組；E組，NGFβ/HIF-1α雙基因轉(zhuǎn)染組。最后，通過透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，MTT法檢測細(xì)胞增殖能力，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，體外軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞成瘤性，評測攜載目的基因的BMSCs的生物學(xué)功能及生物安全性。數(shù)據(jù)采用SPSS19．0統(tǒng)計(jì)軟件，方差分析比較組間差異。 結(jié)果 1、在倒置顯微鏡下觀察，BMSCs呈貼壁樣生長，培養(yǎng)3-5天，BMSCs的基本形態(tài)為長梭形...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1培養(yǎng)1d時(shí)BMSCs（×400）

圖1.1培養(yǎng)1d時(shí)BMSCs（×400）圖1.2培養(yǎng)3d時(shí)BMSCs（×400AB

圖1.2培養(yǎng)3d時(shí)BMSCs（×400）

圖1.1培養(yǎng)1d時(shí)BMSCs（×400）圖1.2培養(yǎng)3d時(shí)BMSCs（×400AB

圖2.1MOI=5、10、50、100時(shí)B組轉(zhuǎn)染效率（×400）

附圖：圖1.1培養(yǎng)1d時(shí)BMSCs（×400）圖1.2培養(yǎng)3d時(shí)BMSCs（×400）

圖2.2MOI=5、10、50、100時(shí)C組轉(zhuǎn)染效率（×400）

34圖2.2MOI=5、10、50、100時(shí)C組轉(zhuǎn)染效率（×400）注：AMOI=5BMOI=10CMOI=50DMOI=100

本文編號：4035555