siRNA由于其自身特有的沉默基因的作用而被廣泛應(yīng)用于基因功能研究和藥物開(kāi)發(fā)中。在臨床運(yùn)用中，人們必須對(duì)siRNA進(jìn)行化學(xué)修飾以克服天然siRNA本身在血清穩(wěn)定性以及脫靶效應(yīng)等方面的局限性。但化學(xué)修飾也是把雙刃劍，雖然修飾后的siRNA在血清穩(wěn)定性等方面得到了顯著提高，但卻往往會(huì)降低沉默基因的活性。如何合理地修飾才能使siRNA在提高血清穩(wěn)定性的同時(shí)又不喪失活性是這個(gè)領(lǐng)域的一個(gè)挑戰(zhàn)，而這個(gè)問(wèn)題的本質(zhì)是缺乏對(duì)siRNA化學(xué)修飾與活性兩者間關(guān)系的機(jī)理的闡釋。雖然之前有不少科研人員做過(guò)這方面的嘗試，但是都沒(méi)有得到系統(tǒng)的、完善的解決方法�；谶@個(gè)問(wèn)題對(duì)siRNA制藥領(lǐng)域的重要性，我們針對(duì)siRNA化學(xué)修飾位點(diǎn)與活性兩者間的關(guān)系進(jìn)行了系統(tǒng)的研究和分析。 為了探究siRNA的化學(xué)修飾所在位點(diǎn)與活性的關(guān)系，本研究對(duì)兩條siRNA的反義鏈2-19位的核苷酸依次進(jìn)行單核苷2’-OMe修飾并檢測(cè)各自的活性。發(fā)現(xiàn)siRNA的反義鏈的不同位點(diǎn)對(duì)于2’-OMe修飾的容忍性各不相同，這暗示著siRNA中存在著化學(xué)修飾位點(diǎn)特異性的現(xiàn)象。而且我們發(fā)現(xiàn)14位點(diǎn)對(duì)2’-OMe修飾的容忍性最差，而該位點(diǎn)在之前文獻(xiàn)中并沒(méi)...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1-2Argonaute蛋白家族的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

圖1-2Argonaute蛋白家族的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)[88]。黑色的線表示Argonaute-like亞家族，綠色的線表示PIWI-like亞家族，紅色的線表示C.elegans-specificgroup3亞家族。1.2.2Argonaute蛋白的結(jié)構(gòu)AG....

圖1-3人類AGO2蛋白的晶體結(jié)構(gòu)

來(lái)[100]。MID結(jié)構(gòu)域呈現(xiàn)“Rossmann-like”的折疊形式[100]，有一個(gè)小RNA5’末端的結(jié)合口袋可以將小RNA錨定在Ago蛋白上[90,101-103]，此外還有一個(gè)潛在的靶mRNA5’-m7G帽子的結(jié)合位點(diǎn)[104]。PIWI結(jié)構(gòu)域的折疊....

圖1-5AGO蛋白家族在siRNA，miRNA，piRNA三種小RNA的生成以及功能發(fā)揮的過(guò)程中扮演著重要的角色[88]

北京大學(xué)博士研究生學(xué)位論文siRNA化學(xué)修飾位點(diǎn)特異性的機(jī)理研究1.2.3Argonaute蛋白與小RNA的裝載AGO蛋白有識(shí)別小RNA3....

圖1-5miRNA發(fā)揮基因沉默作用示意圖

圖1-5miRNA發(fā)揮基因沉默作用示意圖[88]。miRNA在靶標(biāo)mRNA翻譯起始和翻譯延伸兩個(gè)階段發(fā)揮功能。3）AGO蛋白在piRNA通路中的作用piRNA的生成需要PIWI-like亞家族的參與。與siRNA，miRNA不同，piRNA的生成并不....

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