目的本研究旨在圍繞前期研究中發(fā)現(xiàn)的存在于骨肉瘤的特異性新頻發(fā)LRP1-SNRNP25融合基因,首先發(fā)現(xiàn)該融合基因在DNA水平上的結構和斷裂位點,明確其形成機制,然后探討LRP1-SNRNP25融合基因對骨肉瘤細胞的侵襲、遷移以及成瘤和遠處轉移能力的影響,之后尋找LRP1-SNRNP25融合基因下游的信號分子通路,明確LRP1-SNRNP25融合基因在骨肉瘤中發(fā)揮促侵襲和遷移作用的分子機制,為針對LRP1-SNRNP25融合基因的靶向治療奠定基礎,探索骨肉瘤中LRP1-SNRNP25靶向治療新靶點。方法1.HiSeq X Ten平臺對LRP1-SNRNP25融合基因陽性標本進行全基因組測序。針對已經(jīng)檢測到的LRP1-SNRNP25融合基因陽性的1例骨肉瘤樣本,提取基因組DNA,采用HiSeq X Ten平臺進行全基因組測序(WGS),結合生物信息學分析技術,明確LRP1-SNRNP25融合基因在DNA水平上的結構,并驗證該融合基因的存在。2.探討LRP1-SNRNP25融合基因過表達對骨肉瘤細胞的侵襲、遷移以及成瘤和遠處轉移能力影響。一方面,構建LRP1-SNRNP25質粒,購買LRP1和...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、LRP1-SNRNP25 融合基因的發(fā)生機制、結構及其斷裂位點
    1.1 對象和方法
        1.1.1 1例LRP1-SNRNP25 融合基因陽性的骨肉瘤組織標本
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要的試劑配方
        1.1.5 實驗方法
    1.2 結果
        1.2.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測證明樣本中DNA的完整性
        1.2.2 Hi SeqXTen全基因組測序在DNA水平上驗證了LRP1-SNRNP25 的存在及其結構
    1.3 討論
    1.4 小結
二、構建LRP1-SNRNP25、LRP1、SNRNP25 穩(wěn)定表達的骨肉瘤細胞系
    2.1 對象和方法
        2.1.1 細胞系和質粒
        2.1.2 主要試劑和耗材
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 實驗用試劑的配制
        2.1.5 實驗方法
    2.2 結果
        2.2.1 LRP1-SNRNP25 過表達質粒構建與鑒定
        2.2.2 Westernblot檢測轉染后骨肉瘤細胞143B和 SAOS2中LRP1、SNRNP25、LRP1-SNRNP25 的蛋白表達水平
    2.3 討論
    2.4 小結
三、LRP1-SNRNP25 融合基因對骨肉瘤細胞侵襲和遷移的影響
    3.1 對象和方法
        3.1.1 穩(wěn)轉細胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑配方
        3.1.5 實驗方法
    3.2 結果
        3.2.1 LRP1-SNRNP25 融合基因對骨肉瘤細胞遷移、侵襲能力的影響
    3.3 討論
    3.4 小結
四、LRP1-SNRNP25 融合基因促進骨肉瘤細胞的遷移和侵襲能力的分子機制研究
    4.1 對象和方法
        4.1.1 細胞系
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設備
        4.1.4 主要試劑的配制
        4.1.5 實驗方法
    4.2 結果
        4.2.1 LRP1-SNRNP25融合基因上調p JNK和 MMP2 的表達水平
        4.2.2 在骨肉瘤細胞中LRP1-SNRNP25 融合蛋白與37LRP相互結合
        4.2.3 在骨肉瘤細胞中LRP1-SNRNP25 融合蛋白與p JNK、37LRP蛋白共定位
        4.2.4 LRP1-SNRNP25 融合蛋白與p JNK、37LRP蛋白相互作用
        4.2.5 針對37LRP的小干擾RNA降低LRP1-SNRNP25 上調的MMP2 表達水平
        4.2.6 pJNK抑制劑SP600125 抑制LRP1-SNRNP25 上調的37LRP/MMP2表達水平
        4.2.7 p JNK抑制劑SP600125 抑制LRP1-SNRNP25 增強的骨肉瘤細胞的侵襲和遷移作用
        4.2.8 針對37LRP的小干擾RNA抑制LRP1-SNRNP25 增強的骨肉瘤細胞的侵襲和遷移作用
        4.2.9 MMPs抑制劑Marimastat抑制LRP1-SNRNP25 增強的骨肉瘤細胞的侵襲和遷移作用
    4.3 討論
    4.4 小結
五、在小鼠體內LRP1-SNRNP25 融合基因對增殖和轉移的影響
    5.1 對象和方法
        5.1.1 實驗對象
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要試劑配方
        5.1.4 實驗方法
    5.2 結果
        5.2.1 在小鼠皮下骨肉瘤模型中LRP1-SNRNP25 融合基因促進腫瘤生長
        5.2.2 免疫組化實驗檢測LRP1-SNRNP25 高表達143B細胞和空載143B細胞種植的小鼠皮下骨肉瘤模型的瘤塊中LRP1-SNRNP25,p-JNK,MMP2,ki67 的表達情況
        5.2.3 SP600125 可以抑制LRP1-SNRNP25 高表達143B細胞種植的小鼠皮下骨肉瘤模型的腫瘤生長
        5.2.4 在小鼠尾靜脈轉移模型中LRP1-SNRNP25 促進腫瘤的轉移
    5.3 討論
    5.4 小結
全文結論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 低密度脂蛋白受體相關蛋白 1 在腫瘤中的作用研究
    參考文獻
附件
致謝
個人簡歷



本文編號：4046876