目的:探究氯喹對CoCl₂誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞凋亡的保護作用。方法:小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞RGC-5細胞加入300μmol/L CoCl₂及30μmol/L氯喹處理24 h后,采用qPCR、Western blot、flow cytometry及MTT法分別檢測自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3b、Atg5、Atg7、自噬相關(guān)蛋白LC3、凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的表達、細胞凋亡率和細胞存活率。結(jié)果:相比于單純CoCl₂組,CoCl₂及氯喹處理后的RGC-5細胞中,相關(guān)基因Beclin1、LC3b、Atg5、Atg7、自噬相關(guān)蛋白LC3B、凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3均被明顯抑制（P<0.05）,細胞凋亡率顯著下降（P<0.05）,細胞存活率明顯升高（P<0.05）。結(jié)論:自噬抑制劑氯喹抑制CoCl₂導(dǎo)致的細胞自噬和凋亡,從而保護視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞。

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圖1 qPCR檢測自噬基因相對表達量

CoCl2能夠誘導(dǎo)細胞慢性缺氧損傷而發(fā)生凋亡。實驗結(jié)果顯示,用300μmol/L的CoCl2處理后,RGC-5細胞中自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3b、Atg5及Atg7等均有顯著上調(diào)(圖1、表2)。Westernblot結(jié)果也表明,經(jīng)CoCl2處理后,細胞自噬相關(guān)蛋白LC....

圖2 Western blot檢測自噬蛋白LC3B和凋亡蛋白Caspase-3的表達

表2qPCR檢測自噬基因相對表達量(xˉ±s)Tab.2RelativeexpressionofautophagyrelatedgenesdetectedbyqPCR(xˉ±s)GroupsBeclin1LC3bAtg5Atg7C....

圖3 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況

圖2Westernblot檢測自噬蛋白LC3B和凋亡蛋白Caspase-3的表達圖4MTT法檢測細胞存活率

圖4 MTT法檢測細胞存活率

圖3流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況表3細胞凋亡及存活比例(xˉ±s,%)Tab.3Cellapoptosisandsurvivalratio(xˉ±s,%)GroupsEarlyapoptoticcellsLateapoptoticcel....

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