目的:通過(guò)構(gòu)建小鼠穿透性角膜移植模型探討角膜植片細(xì)胞衰老對(duì)角膜移植免疫排斥反應(yīng)的影響及機(jī)制。方法:1、小鼠角膜移植免疫排斥期間的細(xì)胞衰老表型分析。分別以BALB/C或C57BL/6小鼠為角膜供體,BALB/C小鼠為角膜受體構(gòu)建穿透性角膜移植模型,分為正常組、同系角膜移植組和異系角膜移植組,于移植免疫排斥反應(yīng)階段收集角膜樣本。通過(guò)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal）染色明確角膜植片的細(xì)胞衰老表型,并借助角膜植片冰凍切片分析衰老細(xì)胞在角膜中的分布;使用Western Blot分析角膜植片中衰老相關(guān)蛋白p16、p21的表達(dá)水平。2、供體角膜衰老相關(guān)基因p16缺失對(duì)小鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)的影響。分別將野生型和p16缺失型的C57BL/6小鼠作為角膜供體構(gòu)建異系角膜移植模型,評(píng)價(jià)角膜供體細(xì)胞衰老對(duì)角膜移植免疫排斥反應(yīng)的影響:通過(guò)裂隙燈觀察角膜移植免疫排斥反應(yīng)并記錄角膜植片存活時(shí)間;通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)評(píng)估不同組別角膜植片中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。3、抗衰老藥物ABT-263清除衰老細(xì)胞對(duì)小鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)的影響。建立...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.角膜移植免疫排斥期間存在細(xì)胞衰老表型(A)正常(Con)、同系(Syn)和異系(Allo)移植組角膜移植免疫排斥期間角膜植片細(xì)胞衰老染色結(jié)果;(B)三組角膜植片SAβ-Gal染色冰凍切片,觀察細(xì)胞衰老表達(dá)與分布;(C)Western Blot檢測(cè)三組小鼠角膜植片衰老蛋白p16及p21的表達(dá)情況。

2、初步明確衰老細(xì)胞可通過(guò)刺激抗原遞呈細(xì)胞活化促進(jìn)角膜移植免疫排斥反應(yīng)。圖2.供體角膜衰老相關(guān)基因p16缺失對(duì)小鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)的影響(A)正常野生型(WT)角膜供體異系移植組和p16缺失型(p16KO)角膜供體異系移植組術(shù)后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier....

圖2.供體角膜衰老相關(guān)基因p16缺失對(duì)小鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)的影響(A)正常野生型(WT)角膜供體異系移植組和p16缺失型(p16KO)角膜供體異系移植組術(shù)后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier生存分析比較兩組小鼠角膜移植術(shù)后植片存活情況;(C)免疫熒光檢測(cè)兩組術(shù)前及角膜移植免疫排斥期間角膜植片中CD45+炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。

圖1.角膜移植免疫排斥期間存在細(xì)胞衰老表型(A)正常(Con)、同系(Syn)和異系(Allo)移植組角膜移植免疫排斥期間角膜植片細(xì)胞衰老染色結(jié)果;(B)三組角膜植片SAβ-Gal染色冰凍切片,觀察細(xì)胞衰老表達(dá)與分布;(C)WesternBlot檢測(cè)三組小鼠角膜植片衰老蛋白p1....

圖3.抗衰老藥物ABT-263可有效清除衰老細(xì)胞(A)使用SAβ-Gal染色檢測(cè)正常小鼠(Con)、異系移植(Allo)和異系移植并ABT-263干預(yù)組(Allo+ABT-263)角膜植片的衰老情況;(B)使用RT-PCR檢測(cè)正常、異系移植和異系移植并ABT-263干預(yù)組角膜植片中衰老相關(guān)基因p16、p21表達(dá)情況,**P<0.01、***P<0.001。

圖2.供體角膜衰老相關(guān)基因p16缺失對(duì)小鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)的影響(A)正常野生型(WT)角膜供體異系移植組和p16缺失型(p16KO)角膜供體異系移植組術(shù)后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier生存分析比較兩組小鼠角膜移植術(shù)后植片存活情況;(C)免疫熒光檢測(cè)兩組術(shù)前....

圖4.清除衰老細(xì)胞可以抑制或減輕角膜移植免疫排斥反應(yīng)(A)異系移植組(Allo)、異系移植并ABT-263干預(yù)組(Allo+ABT-263)術(shù)后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier生存分析比較兩組小鼠角膜移植術(shù)后植片存活情況;(C)RT-PCR檢測(cè)正常小鼠(Con)、異系移植(Allo)、異系移植并ABT-263干預(yù)組(Allo+ABT-263)的角膜植片中主要炎性相關(guān)因子IL-1β、IL-17A、TNF-α、IFN-γ表達(dá)情況,*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。

圖3.抗衰老藥物ABT-263可有效清除衰老細(xì)胞(A)使用SAβ-Gal染色檢測(cè)正常小鼠(Con)、異系移植(Allo)和異系移植并ABT-263干預(yù)組(Allo+ABT-263)角膜植片的衰老情況;(B)使用RT-PCR檢測(cè)正常、異系移植和異系移植并ABT-263干預(yù)組角膜植片....

本文編號(hào)：4052611