肝纖維化是指由多種慢性疾病引起的肝臟持續(xù)創(chuàng)傷修復反應(yīng)而導致的細胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）過度沉積。嚴重的肝纖維化導致肝硬化并引起肝功能衰竭,門靜脈高壓甚至需要肝臟移植治療。長期以來廣泛持續(xù)的肝纖維化被認為是不可逆轉(zhuǎn)的,而越來越多的研究證據(jù)表明,肝纖維化甚至肝硬化都有逆轉(zhuǎn)的可能。對肝纖維化細胞及分子機制的研究表明,多種細胞參與了肝纖維化的形成,其中激活的肝星狀細胞（hepatic stellate cells,HSCs）被認為是促進ECM過度沉積的主要細胞,而多種細胞因子參與了肝星狀細胞的激活,其中轉(zhuǎn)化生長因子β₁（transforming growth factor,TGF-β₁）被認為是最關(guān)鍵的因素之一。其可激活HSCs和調(diào)節(jié)ECM的合成和降解平衡。以干擾HSCs中TGF-β₁及其細胞信號轉(zhuǎn)導通路為靶點的抗肝纖維化治療已成為當今研究的熱點之一。而在肝纖維化及其膠原合成過程中,除TGF-β₁及其細胞信號轉(zhuǎn)導通路外,尚有其他信號途徑參與。前列腺素E₂

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
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1 前言
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物和細胞
        2.1.2 藥物及試劑
        2.1.3 儀器與設(shè)備
    2.2 實驗內(nèi)容與方法
        2.2.1 豬血清誘導大鼠免疫性肝纖維化模型的建立
        2.2.2 實驗分組及給藥方案
        2.2.3 大鼠肝星狀細胞(HSCs)及的分離與培養(yǎng)
        2.2.4 大鼠HSCs細胞增殖和膠原合成的檢測方法
        2.2.5 血清轉(zhuǎn)氨酶活性測定
        2.2.6 羥脯氨酸(Hyp)含量測定
        2.2.7 血清透明質(zhì)酸(HA)、層連蛋白(LN)含量的測定
        2.2.8 血清Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(CⅣ)測定
        2.2.9 MDA含量測定
        2.2.10 SOD活性測定
        2.2.11 GSH-px活性測定
        2.2.12 TNF-α和IL-1β水平測定
        2.2.13 血清TGF-β₁水平的測定
        2.2.14 PGE₂水平測定
        2.2.15 肝臟病理組織學觀察及評分標準
        2.2.16 肝臟免疫組織化學法檢測肝臟組織TGF-β₁表達
        2.2.17 蛋白免疫印跡法檢測Smad3、Smad7及EP₂蛋白表達
        2.2.18 PI染色、流式細胞儀檢測細胞凋亡分析
        2.2.19 Caspase-3活性檢測
        2.2.20 HSCs細胞內(nèi)cAMP水平的測定
        2.2.21 統(tǒng)計學處理
3.結(jié)果
    3.1 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化的保護作用
        3.1.1 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠的保護作用
        3.1.2 AGS-Ⅳ對對豬血清誘導肝纖維化大鼠肝臟病理組織學的影響
        3.1.3 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠肝勻漿Hyp影響
        3.1.4 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ含量的影響
        3.1.5 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠肝勻漿MDA,SOD和GSH-Px水平的影響
        3.1.6 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠血清TGF-β₁水平的影響
        3.1.7 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠肝臟組織TGF-β₁表達的影響
        3.1.8 AGS-Ⅳ對肝纖維化大鼠HSCs增殖及膠原合成的影響
    3.2 AGS-Ⅳ對HSCs增殖、凋亡及膠原合成的影響及對HSCsTGF-β₁/Smads信號通路的影響
        3.2.1 體外不同濃度AGS-Ⅳ對HSCs的毒性作用
        3.2.2 AGS-Ⅳ對PDGF-BB刺激體外培養(yǎng)HSCs增殖的影響
        3.2.3 AGS-Ⅳ誘導HSCs凋亡的作用
        3.2.4 AGS-Ⅳ對HSCs caspase-3活性的影響
        3.2.5 AGS-Ⅳ對TGF-β₁誘導HSCs膠原合成的影響
        3.2.6 AGS-Ⅳ對HSCs中Smad3及Smad7表達的影響
    3.3 PGE₂-EP₂-cAMP在豬血清誘導肝纖維化大鼠和HSCs膠原合成中的作用及AGS-Ⅳ對其影響
        3.3.1 豬血清誘導肝纖維化大鼠血清PGE₂水平的變化
        3.3.2 豬血清誘導肝纖維化大鼠HSCs表達EP₂水平的改變
        3.3.3 降低PGE₂及EP₂表達對豬血清誘導肝纖維化大鼠肝臟組織學影響
        3.3.4 PGE₂水平的降低對豬血清誘導肝纖維化大鼠血清ALT活性、TNF-α和IL-1β水平的影響
        3.3.5 PGE₂及EP₂受體激活劑對HSCs膠原合成的影響
        3.3.6 PGE₂及EP₂受體激動劑HSCs cAMP水平的影響
        3.3.7 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠HSCs中EP₂受體表達的影響
        3.3.8 AGS-Ⅳ對TGF-β₁刺激HSCs中EP₂受體表達的影響
        3.3.9 AGS-Ⅳ對TGF-β₁刺激HSCs cAMP水平的影響
4.討論
    4.1 AGS-Ⅳ對豬血清誘導肝纖維化大鼠的保護作用
    4.2 AGS-Ⅳ對HSCs增殖、凋亡及膠原合成的影響
    4.3 AGS-Ⅳ對HSCsTGF-β₁/Smads信號通路的影響
    4.4 血清PGE₂水平及HSCs中EP₂表達的變化及其對豬血清誘導肝纖維化大鼠影響
5.結(jié)論
    5.1 AGS-Ⅳ對豬血清誘導大鼠肝纖維化具有良好的保護作用
    5.2 AGS-Ⅳ可抑制HSCs的增殖、誘導HSCs凋亡,并通過調(diào)節(jié)TGFβ/Smads信號通路抑制其膠原合成
    5.3 PGE₂-EP₂-cAMP在豬血清誘導肝纖維化大鼠及HSCs膠原合成中的作用及AGS-Ⅳ對其影響
參考文獻
本研究的創(chuàng)新點
個人簡介
致謝
綜述:肝纖維化及以肝星狀細胞TGF-β₁信號轉(zhuǎn)導為靶點的治療



本文編號：4049390