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細(xì)胞珠蛋白在肝纖維化中的抗氧化作用及上調(diào)機(jī)制研究

發(fā)布時間:2025-06-10 01:07
  細(xì)胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)是一種新近發(fā)現(xiàn)的含血紅素輔基的六配位球蛋白,本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)Cygb具有預(yù)防肝纖維化、實現(xiàn)肝纖維化逆轉(zhuǎn)的功能,且其作用是通過調(diào)控HSC的激活狀態(tài)實現(xiàn)的,與肝臟中細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)間的氧化應(yīng)激密切相關(guān)。在此基礎(chǔ)上,本論文選取了兩種肝臟中有代表性的氧化模型:過氧化氫模型及鐵過載模型,系統(tǒng)性研究了Cygb在肝纖維化氧化應(yīng)激中發(fā)揮的具體作用,并結(jié)合microRNA(miRNA)技術(shù),初步探索了Cygb在肝星狀細(xì)胞激活時表達(dá)上調(diào)的可能性機(jī)制。論文在構(gòu)建肝纖維化氧化應(yīng)激體外模型并利用基因工程手段成功純化出重組Cygb蛋白的基礎(chǔ)上,證實不同劑量的過氧化氫或Fe-NTA/AA刺激時,無論是重組Cygb蛋白還是Cygb基因轉(zhuǎn)染都能對人肝星狀細(xì)胞及人肝細(xì)胞產(chǎn)生顯著的保護(hù)作用。重組Cygb蛋白對胞內(nèi)的活性氧清除效果不理想,可能與其進(jìn)出細(xì)胞缺乏相應(yīng)的主動運輸機(jī)制有關(guān);基因轉(zhuǎn)染Cygb質(zhì)粒則對胞外及胞內(nèi)的氧化刺激均有較好的清除作用。利用特異性siRNA干擾人肝星狀細(xì)胞內(nèi)的Cygb mRNA后會使細(xì)胞對過氧化氫及Fe-NTA/AA造成的損傷更加敏感,印證了Cygb在肝星...

【文章頁數(shù)】:187 頁

【學(xué)位級別】:博士

【文章目錄】:
論文摘要
ABSTRACT
引言
    0.1 纖維化細(xì)胞與肝纖維化
        0.1.1 HSC
        0.1.2 其它Myo 祖細(xì)胞
        0.1.3 其他肝纖維化相關(guān)細(xì)胞
    0.2 細(xì)胞因子和信號傳導(dǎo)及肝纖維化
        0.2.1 TGF-β/Smad 信號途徑
        0.2.2 增殖信號途徑
        0.2.3 MAPK 信號
        0.2.4 NF-κB(neuclear factor κB)
        0.2.5 瘦素(leptin)信號途徑
    0.3 基質(zhì)重塑和肝纖維化
        0.3.1 細(xì)胞外基質(zhì)
        0.3.2 ECM 調(diào)節(jié)
        0.3.3 肝纖維化的基質(zhì)重塑
    0.4 氧化應(yīng)激與肝纖維化
        0.4.1 氧化應(yīng)激在不同病因肝纖維化中的作用機(jī)制
        0.4.2 氧化應(yīng)激對肝臟不同細(xì)胞的作用機(jī)制
        0.4.3 氧化應(yīng)激與ECM 合成
    0.5 肝纖維化治療
        0.5.1 針對肝實質(zhì)細(xì)胞及纖維化細(xì)胞
        0.5.2 基于細(xì)胞因子和信號通路的分子治療
        0.5.3 ECM 靶向治療
        0.5.4 抗氧化治療
    0.6 細(xì)胞珠蛋白與肝纖維化
1 肝纖維化氧化應(yīng)激體外研究模型建立
    1.1 材料
        1.1.1 藥品與耗材
        1.1.2 儀器
    1.2 溶液配制及實驗方法
        1.2.1 溶液配制
        1.2.2 實驗方法
    1.3 結(jié)果與討論
        1.3.1 質(zhì)粒提取與鑒定
        1.3.2 細(xì)胞特性觀察
        1.3.3 體外轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化
        1.3.4 H2O2 模型
        1.3.5 Fe-NTA+AA 模型
    1.4 小結(jié)
2 Cygb 在人肝纖維化氧化應(yīng)激中的作用
    2.1 材料
        2.1.1 藥品與耗材
        2.1.2 儀器
    2.2 溶液配制及實驗方法
        2.2.1 溶液配制
        2.2.2 實驗方法
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 質(zhì)粒提取與鑒定
        2.3.2 Cygb 蛋白制備
        2.3.3 Cygb 蛋白對細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用
        2.3.4 Cygb 基因轉(zhuǎn)染對細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用
    2.4 小結(jié)
3 重組 Cygb 蛋白對 rHSC 氧化應(yīng)激的保護(hù)作用
    3.1 材料
        3.1.1 藥品與耗材
        3.1.2 儀器
    3.2 溶液配制及實驗方法
        3.2.1 溶液配制
        3.2.2 實驗方法
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 大鼠肝星狀細(xì)胞(rHSC)分離
        3.3.2 rHSC 純度鑒定
        3.3.3 Cygb 蛋白對rHSC 保護(hù)作用:過氧化氫損傷
        3.3.4 Cygb 蛋白對rHSC 的保護(hù)作用:Fe-NTA/AA 損傷
    3.4 小結(jié)
4 Cygb 在激活態(tài) HSC 中表達(dá)上調(diào)的機(jī)制 ——Microrna 表達(dá)差異
    4.1 材料
        4.1.1 藥品與耗材
        4.1.2 儀器
    4.2 溶液配制及實驗方法
        4.2.1 溶液配制
        4.2.2 實驗方法
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 Cygb 相關(guān)miRNA 預(yù)測
        4.3.2 Collal 相關(guān) miRNA 預(yù)測
        4.3.3 HSC 激活標(biāo)記基因相關(guān)miRNA 預(yù)測
        4.3.4 rHSC 激活前后miRNA 芯片分析
        4.3.5 miRNA 功能驗證
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點
附錄(縮寫)
參與撰寫專著
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號:4050083

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